HTLV-1エンベロープタンパクのT細胞の増殖に対する影響

HTLV-1包膜蛋白对T细胞增殖的影响

• 批准号: 06770235
• 负责人: 赤城 剛
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770235/
• 关键词: HTLV-I; Tリンパ球; 不死化; Tax遺伝子; env遺伝子; IL-2

HTLV-1によるTリンパ球のトランスフォーメーションには、転写活性化因子であるTaxが重要であると考えられているが、我々および他のグループの結果より、Taxの導入は正常Tリンパ球を不死化する事はできるが、多くのHTLV-1感染細胞が示すIL-2非依存的増殖能の獲得までには至らしめない事が示された。このことより、IL-2非依存的増殖能の獲得には、Tax以外のウイルス遺伝子産物が関与している可能性が示唆された。我々は、envタンパクをその有力な候補と考え、HTLV-1env遺伝子産物のTリンパ球の増殖に対する影響の検討を試みた。そのために、まず、HTLV-1env遺伝子発現ベクターを構築した。最終的には、レトロウイルスベクターの系を考えたが、その前段階としてEBウイルス由来のプラスミドベクターpEHT22を用い、マウスH-2プロモーターにHTLV-1env遺伝子産物をつないだpEHT22/H2-env.pXを作成した。このプラスミドベクターをエレクトロポーレーションによって、IL-2依存性HTLV-1感染T細胞KN6-HT、および我々が既に得ているTaxを導入してIL-2依存的に不死化したT細胞PBL/DGL-Tax1に導入し、引き続きハイグロマイシンによる選択を行うことによりenv遺伝子のステーブルトランスフォーマントを得ることを試みた。KN6-HTからはステーブルトランスフォーマントが得られたが、PBL/DGL-Tax1からは得られなかった。KN6-HTのpEHT22/H2-env.pXのステーブルトランスフォーマントをIL-2を除いた培地で培養したところ、大部分の細胞は1ヵ月程度で死滅したが、ごく一部、増殖を続ける細胞が出現してきた。しかしながら、この細胞でのenvタンパクの発現をウエスタンブロットにより解析したところ、親株とほとんど変わらないレベルしか発現していなかった。さらに、親株を同様にIL-2を除いた培地で培養した場合でも、同様の頻度でIL-2非依存性の細胞が出現してきたことにより、IL-2非依存性の細胞の出現は、pEHT22/H2-env.pXの導入によるものではないことがわかり、IL-2非依存的増殖能の獲得におけるenvタンパクの関与の可能性については、否定的な結果が得られた。一方、PBL/DGL-Tax1は、抗CD3で刺激すると、IL-2非依存的増殖反応を示す事がわかり、Tax1のみを導入したT細胞も、IL-2非依存的増殖のパスウェーを潜在的に持っていることが示唆された。

尽管税收是一种转录激活剂，但被认为对于通过HTLV-1转化T淋巴细胞至关重要，但我们和其他组的税收表明，尽管税收的引入可以使正常T淋巴细胞永生化，但它并不会导致IL-2独立的非依赖性潜在的HTLV-1 infected细胞的潜在。这表明，税收以外的病毒基因产物可能参与获得IL-2独立的增殖潜力。我们认为ENV蛋白是潜在的候选者，并试图研究HTLV-1ENV基因产物对T淋巴细胞增殖的影响。为此，首先构建了HTLV-1ENV基因表达载体。最终，我们考虑了逆转录病毒矢量系统，作为初步步骤，使用源自EB病毒的质粒矢量PEHT22创建了PEHT22/H2-ENV.PX，该质粒矢量PEHT22与HTLV-1ENV基因产物连接到小鼠H-2启动子。通过电穿孔到IL-2依赖性的HTLV-1感染的T细胞KN6-HT中引入该质粒载体，我们已经获得了转移IL-2依赖性的永生T细胞PBL/DGL-TAX1的税收，并随后使用Hygromycin进行选择以获得Env Gene的稳定转化体。稳定的转化体是从KN6-HT获得的，但不是从PBL/DGL-TAX1获得的。当KN6-HT PEHT22/H2-ENV.PX稳定转化剂在不包括IL-2的培养基中培养时，大多数细胞在大约一个月内死亡，但一小部分细胞继续生长。但是，当通过蛋白质印迹分析ENV蛋白在该细胞中的表达时，表达水平仅与父菌株的表达水平几乎相同。 Furthermore, when the parent strain was similarly cultured in medium without IL-2, IL-2 appeared, and similar frequency of IL-2-independent cells showed that the appearance of IL-2-independent cells was not due to the introduction of pEHT22/H2-env.pX, resulting in negative results regarding the possibility of the involvement of env proteins in the acquisition of IL-2-independent proliferative potential.另一方面，当用抗CD3刺激时，PBL/DGL-TAX1表现出IL-2非依赖性增生反应，这表明单独使用税收1转导的T细胞也可能具有非依赖IL-2的途径。