造血系シグナル伝達における細胞質チロシンキナーゼ及び核移行転写制御因子の特異性

细胞质酪氨酸激酶和核转位转录调节因子在造血系统信号转导中的特异性

基本信息

批准号：
08458227
负责人：
井川洋二
金额：
$ 5.57万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

エリスロポエチン(EPO)の自然標的細胞である赤芽球系細胞において、エリスロポエチン受容体(EPOR)の下流のJAKファミリーとSTATファミリー遺伝子の発現を解析した。検索対象は、フェニルヒドラジンで誘導された貧血症マウスの脾腫から分離された正常とみなされる赤芽球系細胞と、Friend白血病ウィルス(多血症株)で誘導されたマウス脾腫から分離された赤芽球系細胞を用い、それぞれをTER119抗体を指標に分画した標品について純度が得られた。これらの細胞においてEPOR特異抗体で沈降する蛋白をJAKファミリーの抗体で検索したところ、前者では、EPO依存性にJAK2、STAT5がチロシン燐酸化され、STAT5は核内へ移行し、STAT5A、Bが結合するGAS配列、PRE配列と特異的に結合した。後者では、EPOの有無に拘わらず、JAKI、STAT5が恒常的にチロシン燐酸化されていたが、STAT5は核内移行を示さず、従ってSTAT5の結合するGAS、PRE配列とは結合できなかった。この系にEPOを添加したところSTAT5は瞬時に核移行を示し、EPOとの共働ではじめて増殖シグナルを送ることが初めて示され、ウィルス性白血病発症における、ウィルス遺伝情報とサイトカインシグナルの強調した機能発揮が明らかにされた。今後EPO/EPOR、gp55/EPORを介するSTAT5のチロシン燐酸化状態の差を同蛋白の燐酸化、アミノ酸の同定を含め検討したい。他方、フレンド白血病細胞系ではEPOR下流のRas機能を打ち消すDN-Rasを導入・発現させると分化が誘導され、MAPK回路がこの現象に関与していることが示され、現在、各種阻害剤を用いてその詳細を検討している。

在红细胞生成素细胞中分析了红细胞生成素受体（EPOR）下游的JAK和STAT家族基因的表达，这些细胞是促红细胞生成素（EPO）的天然靶细胞。对于被认为是正常的红细胞细胞获得的纯度，是从苯基羟嗪诱导的贫血小鼠的脾肿大和红细胞细胞中分离出来的，这些细胞是由朋友白血病病毒（多余菌血）诱导的小鼠脾肿大分离的，且每一种都使用TER119抗体作为Antib insex分类。当将这些细胞中Epor特异性抗体沉淀的蛋白质以EPO依赖性方式磷酸化，而STAT5在前者中搜索来自JAK家族的抗体，而STAT5则被转移到细胞核中，并特异性地与STAT5A和B结合的气体和预先序列结合。在后一种情况下，无论EPO的存在或不存在，Jaki和STAT5磷酸化的组成性酪氨酸磷酸化，但STAT5并未显示核易位，因此无法与与STAT5结合的气体和前序列结合。当将EPO添加到该系统中时，STAT5立即表现出核易位，首先证明可以与EPO合作发送扩散信号，从而揭示了病毒性白血病发作中对病毒遗传信息和细胞因子信号的重视。将来，我们想通过EPO/EPOR和GP55/EPOR考虑Stat5酪氨酸磷酸化状态的差异，包括蛋白质的磷酸化和氨基酸的鉴定。另一方面，在朋友白血病细胞系中，DN-RAS的引入和表达抵消了EPOR下游的RAS功能，诱导了分化，表明MAPK电路参与了这种现象，并且目前正在使用各种抑制剂研究细节。