X染色体不活化の検出による皮膚前癌病変におけるクローナリティに関する研究

X染色体失活检测皮肤癌前病变克隆性研究

• 批准号: 07770657
• 负责人: 宇原 久
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770657/
• 关键词: X染色体不活化; アンドロゲル受容体遺伝子; 皮膚腫瘍; モノクローナリティ

本研究は、1992年 Allenらによって明らかにされたアンドロゲン受容体遺伝子塩基配列をもとに、女性の約90%に保存されているCAG繰り返し配列部分をPCR法によって検出することにより、皮膚腫瘍において良性、境界型、悪性に分類されているものについてそのモノクローナリテイの有無を検出することにより、腫瘍細胞の単一性という面から再評価することを目的とする。本年度はまず、安定した実験方法の確率をめざした.8例の女性メラノーマ患者より得られたホルマリン固定パラフィン包埋組織より腫瘍部分と非腫瘍部分を切り出しDNAを抽出後、サンプルの一部を制限酵素Hhalで処理した。次にアンドロゲン受容体遺伝子のCGA繰り返し配列部分をはさむ形で作成したプライマーを用いて、制限酵素処理後のサンプルと未処理のサンプルについてPCR法で増幅を試みた。 しかし、当初期待していた程度のDNAの増幅が得られなかった。 メラニンによる阻害作用あるいはサンプル内に混入しているポリメラーゼ阻害物質の存在が疑われたためキレートビーズなどによるサンプルの洗浄を行いインターナルコントロールの増幅は可能となったが、アンドロゲン受容体遺伝子の増幅が不良(8例中1例のみ増幅した)のため、さらにプライマー位置を変更し再度増幅を試みている。また増幅された1例のサンプルについてはプライマーの一方のみを標識しPCR法による増幅後ポリアクリルアミドゲル上での泳動を行っている。

这项研究是一种皮肤肿瘤，通过检测基于艾伦和其他人在1992年揭示的雄激素受体碱基序列中储存在约90％女性中的CAG重复序列的重复。其目的是重新评估那些被归类为良性的，这些序列是对良性的评估。边界类型和恶性，通过检测单克隆关系的存在或不存在。首先，稳定实验方法的目的是稳定的实验方法的概率。一些样品受到限制。接下来，我们尝试使用以雄激素受体基因的重复阵列部分形式产生的引物在限制酶处理和未加工的样品后尝试扩增样品和未加工的样品。 但是，最初的等待没有DNA扩增。 怀疑黑色素的抑制作用或聚合酶抑制剂的存在，怀疑是混合样品中的抑制作用，因此内部对照是通过螯合珠的清洁样品进行扩增的（只有八个病例中的一个被放大了），因此进一步的引物位置是进一步的更改并再次尝试了放大。在一个放大的样品之一中，仅签署其中一个引物，在通过PCR方法放大后，在聚丙烯甲酰胺类凝胶上进行游泳。