CGH法による悪性黒色腫の早期病変における遺伝子変化の検索

利用CGH方法寻找恶性黑色素瘤早期病变的基因变化

基本信息

批准号：
09770620
负责人：
宇原久
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770620/
关键词：
悪性黒色腫遺伝子 CGH法 HSH法 Comparative genomic hybridization(CGH)melanoma

项目摘要

これまで新鮮凍結標本を用いて、研究方法の確立および結果の再現性について検討を行ってきた。(材料および方法)本邦人に発生し、かつ日光紫外線の関与が少ないタイプの悪性黒色腫原発巣10例(全てlevel III以上)、皮膚転移巣4例、リンパ節転移巣2例(計16例)、脂漏性角化症3例、ケラトアカントーマ3例の新鮮材料よりDNAを抽出後、Nick translation法でspectrumgreen-dUTPを用いて標識した。同様に正常人リンパ球から抽出したDNAをspectrumred-dUTPで標識した。DNAの純化後、Cot-1 DNAを加え、その後熱処理による変性を行った。常法通り作成し保存してある正常人末梢リンパ球染色体標本を熱変性後、脱水し、上記標識後の腫瘍細胞DNAおよび正常リンパ球DNAを標本上に乗せハイブリダイズを行った。DAPIによる染色体の対比染色を行った後に蛍光顕微鏡下でspectrumgreen、spectrumred、DAPIそれぞれの染色像を1検体当たり約20個の染色体標本についてCCDカメラでデジタルgray scaleイメージとして取り込み、それぞれに疑似カラーを与え重ねた後、3種の合成イメージを作った。合成色のシグナル強度をスキャンし欠失あるいは増幅している染色体部位を特定した(Cyto Vision A/W,APPLIED IMAGING社を使用)。(結果)解析が可能であった悪性黒色腫症例は16例中13検体で、2症例は原発巣と転移巣の比較が可能であった。1検体当たりの解析可能染色体標本数は8〜24個であった。原発巣におけるchromosomeimbalancesは欠失が染色体1,9,11,13-16,19,21に、増幅が10,15,16,21,22,XYを除く染色体にみられたが症例毎にかなりの多様性を示した。また、原発巣と転移巣間の比較では、両者間の染色体の変化は概ね一致しており、さらに1例は6q,8,14qに、もう1例は1p,4q,9pに転移後の変化がみられ、CGH法がこの種の比較に非常に有用であるとの印象を持った。現在、原発巣と転移巣の両者の病変を持つ症例を増やすと共に良性病変についても検討を進めている。

到目前为止，我们一直在使用新鲜的冷冻标志来检查结果的研究方法和可重复性。（材料和方法）10例恶性黑色非洲核电剧电厂（所有级别III或更多），4例恶性黑色病例在日本人中发生，几乎没有参与阳光紫外线射线，2例淋巴结转移（16例）（16例总共）））从3例患者脂肪角度角度和三个角膜瘤瘤中提取DNA后，使用Spectrumgreen-DUTP签署了nick translation方法。同样，从正常淋巴细胞中提取的DNA通过Spectrumred-DUTP签名。纯化DNA后，加入COT-1 DNA，然后通过热处理进行变性。加热后，在像往常一样产生并保存外周淋巴染色体标本后，将上述符号后的肿瘤细胞DNA和正常淋巴细胞DNA添加在样品上，以执行杂交。 DAPI spectrumgreen，频谱，dapiそれぞれの染色像をdapiそれぞれの染色像を1検体当たり约20个の染色体标本についてCCD灰度灰度イメージとして取り込み、それぞれに疑似カラーを与え堆叠后，我制作了三个合成图像。识别扫描合成颜色信号强度，已删除或放大的染色体部分（使用cyto Vision A/W，应用成像）。（结果）在16例恶性黑肿瘤病例中，有13例可以进行分析，并且可以在核能和转移酶之间比较两例。每个样品的分析染色体标本的数量为8至24。除XY以外，染色体中的染色体染色体散发损失，删除1,9,9,11,11,11,13-16,19,211显示多样性。此外，与核和转移巢之间的相比，两者之间的染色体的变化通常是匹配的，一个情况是6q，8,14q，另一个情况是1p，4q，9p。 CGH方法对于这种比较非常有用。目前，核电和转移之间病变的病例数量正在增加，并且也正在考虑良性病变。