大腸菌増殖定常期待特異的シグマ因子(σ^<38>)のプロモーター認識特異性

大肠杆菌生长平稳的启动子识别特异性预期特异性西格玛因子 (σ^<38>)

• 批准号: 07760074
• 负责人: 田中 寛
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760074/
• 关键词: Escherichia coli; RNA polymerase; sigma factor; promoter; rpos

1、大腸菌の2種の主要(型)シグマ因子のプロモーター認識特異性を調べるために、コンセンサス型プロモーターのうち、両者に認識されるlacUV5、およびσ^<70>にのみ認識されるalaSプロモーターを用いて解析を行った。前年度までの解析により、この認識の違いは、-10領域とその周辺領域に由来することが判明している。alaSプロモーターを基に、部分的に塩基配列をlacUV5型に変異させた一連のプロモーターを作成し、2種のシグマ因子による認識を調べた。その結果、-10領域ヘキサマー配列がlacUV5型(コンセンサス型)であることがEσ^<38>による認識に必要十分であることが明らかになった。2、Eσ^<38>に認識されるficおよびlacUV5プロモーターを用い、-35領域が認識特異性に及ぼす影響を調べるために、-35領域を含む上流配列を他の配列に置換した一連のプロモーターを作成した。これらの変異プロモーターが野生型と同様にEσ^<38>に認識されたことから、Eσ^<38>による認識は-10領域のみでなされることが考えられた。3、Eσ^<38>がEσ^<70>と同様に、CRPなどの転写因子や、プロモーター上流のDNA配列であるUP-elementからの活性化シグナルを受けるかどうかを調べるために、gal、lac、rrnBプロモーターを用いた解析を行った。その結果、gal、lacプロモーターにおいて、Eσ^<38>はCRPによる活性化を受けることができた。また、rrnBプロモーターからの転写は、上流のUP-elementにより活性化された。従ってEσ^<38>でもEσ^<70>と同様に、RNAポリメラーゼのαサブユニットを介した転写の活性化機構が働くことが強く示唆された。

1。为了调查大肠杆菌中两个主要（类型）Sigma因子的启动子识别特异性，使用ALAS启动子进行了分析，Alas启动子仅由LACUV5识别，Lacuv5识别出共识启动子和Alas启动子，仅通过σ^<70>识别。直到上一年的分析表明，这种感知的差异源于-10地区及其周围地区。基于ALAS启动子，创建了一系列启动子，其中将基本序列部分突变为LACUV5类型，并检查了两个Sigma因子的识别。结果，据揭示了-10区六聚体序列是LACUV5型（共有类型）是必要的，足以通过Eσ^<38>识别。 2。为了研究-35区域对识别特异性的影响，创建了一系列启动子，其中使用Eσ^<38>识别的FIC和LACUV5启动子，将包含-35区域的上游序列替换为另一个序列。由于这些突变启动子通过Eσ^<38>与野生型相同的方式识别，因此，人们认为仅在-10区进行了Eσ^<38>识别。 3。与Eσ^<70>相似，使用GAL，LAC和RRNB启动子进行分析，以确定Eσ^<38>是否从转录因子（例如CRP或UP-元素）接收激活信号，例如CRP或UP-元素，这是启动子上游的DNA序列。结果，Eσ^<38>能够在GAL和LAC启动子中进行CRP激活。 RRNB启动子的转录也通过上游上游元素激活。因此，强烈建议Eσ^<38>类似于Eσ^<70>，它是通过RNA聚合酶α-亚基激活转录的机制。

项目成果

Hidenori Shinkawa: "Purification and Characterization of RNA polymerase holoenzyme (Eσ^8) from vegetative-phase mycelia of Streptomyces griseus" J. Biochem.118. 488-493 (1995)

Hidenori Shinkawa：“来自灰色链霉菌营养期菌丝体的 RNA 聚合酶全酶 (Eσ^8) 的纯化和表征”J. Biochem.118 (1995)。

Ryutaro Utsumi: "Mutational Analysis of the fic Promoter Recognized by Rpo S (σ^<38>) in Escherichia coli" Biosci. Biotech. Biochem.59. 1573-1575 (1995)

Ryutaro Utsumi：“大肠杆菌中 Rpo S (σ^<38>) 识别的 fic 启动子的突变分析”Biosci.59 (1995)。

Nicholas F. Tsinoremas: "A Sigma factor that modifies the circadian expression of a subset of genes in cyanobacteria" EMBO J.(印刷中).

Nicholas F. Tsinoremas：“一种调节蓝细菌基因子集昼夜节律表达的 Sigma 因子” EMBO J.（正在出版）。

Tomoko Araya-Kojima: "Identification and Molecular Analysis of Lactococcus lactis rpoD operon" Biosci. Biotech. Biochem.59. 73-77 (1995)

Tomoko Araya-Kojima：“乳酸乳球菌 rpoD 操纵子的鉴定和分子分析”Biosci。

Kan Tanaka: "Promoter determinants for Escherichia coli RNA polymerase holoenzyme containing σ^<38> (the rpoS gene product)" Nucleic Acids Res.23. 827-834 (1995)

Kan Tanaka：“含有 σ^<38>（rpoS 基因产物）的大肠杆菌 RNA 聚合酶全酶的启动子决定子”Nucleic Acids Res.23（1995）。