大腸菌増殖定常期および緊縮応答時に特異的なσ因子、σ^<38>の発現調節

在大肠杆菌生长稳定期和严格性响应期间调节特定 σ 因子 σ^<38> 的表达

基本信息

批准号：
06760073
负责人：
田中寛
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760073/
关键词：
Escherichia coli RNA polymerase sigma factor trans cription ppGpp stationary phase stringent response promoter

项目摘要

(1)rpoS遺伝子の発現はこれまでに、転写、翻訳、翻訳後の蛋白質安定性の少なくとも3段階で制御されていることが知られている。ppGppを欠く大腸菌株(ΔrelA、ΔspoT)においては、菌体内にRpoS蛋白質が蓄積しないことが知られている。その分子機構を調べるため、rpoS遺伝子上流部分にlacZ遺伝子を連結し、転写および翻訳レベルでの融合遺伝子を作製、ラムダファージを利用したベクターを用いて1コピーで染色体上に導入した。その結果、ppGppを欠く株において、rpoS遺伝子の転写活性が90%程度低下していることが明かとなり、少なくともppGppがrpoS遺伝子の転写を正に制御していることが判明した。これはrpoS遺伝子の主要な転写を司るP2プロモーターが、ppGppにより正に制御されるヒスチジン合成系のプロモーターと相同性を示すこととよく一致した。(2)RpoS遺伝子産物を含むRNAポリメラーゼホロ酵素(Eσ^<38>)のプロモーター認識特異性について、様々な改変プロモーターを用いたin vitroにおける解析を行なった。その結果、Eσ^<38>がとEσ^<70>同様の-10コンセンサス配列を認識することが明らかになった。即ち、TATAATをコンセンサスとするプロモーター配列は、これら2種のホロ酵素により共通に認識される。

（1）迄今为止众所周知，RPOS基因的表达至少以三个步骤进行调节：转录，翻译和翻译后蛋白质稳定性。众所周知，在缺乏PPGPP（ΔRela，ΔSpot）的大肠杆菌菌株中，RPOS蛋白不会在细胞中积聚。为了研究分子机制，将LACZ基因与RPOS基因的上游部分相关联，在转录和翻译水平上创建了融合基因，并使用Lambda Phage在一个副本中将染色体引入染色体中。结果，发现在缺乏PPGPP的菌株中，RPOS基因的转录活性减少了约90％，并且至少PPGPP阳性地调节了RPOS基因的转录。这与控制RPOS基因的主要转录的P2启动子非常吻合，显示了与组氨酸合成系统的启动子的同源物，该系统由PPGPP积极控制。（2）使用各种修饰启动子对含有RPOS基因产物的RNA聚合酶全酶（Eσ^<38>）的启动子识别特异性（Eσ^<38>）进行体外分析。结果表明，Eσ^<38>识别Eσ^<70>的类似-10共有序列。也就是说，这两种类型的全酶通常认识到与tataat共识的启动子序列。