Elucidation of the mechanism of tissue repair of macular hole and possibility of treatment using amniotic membrane

黄斑裂孔组织修复机制的阐明及羊膜治疗的可能性

基本信息

批准号：
22K16957
负责人：
田中寛
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16957/
关键词：
黄斑円孔羊膜

项目摘要

難治性黄斑円孔に対して他家移植である羊膜移植が注目されているが、未だ組織修復や視機能改善のメカニズムは明らかにはなっていない。本研究の目的は、in vitro実験において羊膜上と網膜細胞の遊走伸展との関係を明らかにし、家兎の黄斑円孔モデルを用いて生体内での羊膜の役割を明らかにすることである。ミュラー細胞の羊膜に対する接着能、遊走能の検討においては、in vitro実験において24wellプレートに羊膜を貼り付けた２群；上皮側を表にして貼り付けた群(上皮群)、絨毛膜側を表にして貼り付けた群（絨毛膜群）を作成し、中央に3mm径のシリコンを留置する（各n=5）。それぞれの群に0.5x105個のヒトミュラー細胞を播種し24時間後にシリコンを除去する。除去直後、また72時間後に位相差顕微鏡画像を撮影、免疫細胞染色（phalloidin）を行い、それらの画像より細胞形態を評価、また細胞移動面積を測定して細胞の遊走能を評価した。ミュラー細胞は羊膜の上皮側では仮足を伸ばし、縦横比が高い接着像が得られた一方で絨毛膜側では円形で縦横比が低い接着性を示す像が得られた。遊走実験においては、上皮側では絨毛膜側に対して有意に遊走能が高い(t検定; p<0.05)結果が得られた。次に、in vivoでの羊膜移植の有効性を確認するため、家兎の網膜円孔モデルを作成した後、コントロール（無治療群）と羊膜移植を行った群（羊膜群）において組織修復過程の差を画像解析にて確認した。修復後の組織を家兎の黄斑円孔モデルに対して羊膜を挿入し2mm径の円孔部に同径の羊膜を留置し、術後のOCT画像の取得に成功した。

羊膜移植作为同种异体移植，用于治疗难治性黄斑裂孔而受到关注，但其组织修复和视功能改善的机制尚未阐明。本研究的目的是通过体外实验阐明羊膜与视网膜细胞迁移的关系，并利用兔黄斑裂孔模型阐明羊膜在体内的作用。在检查Müller细胞对羊膜的粘附和迁移能力时，在体外实验中，将羊膜粘贴到24孔板上，分为两组；A组（绒毛膜组）是通过贴附膜而形成的。到膜上，并在中心放置一个直径为 3 mm 的硅胶片（每个 n = 5）。每组接种 0.5x105 个人类 Muller 细胞，24 小时后除去硅胶。取出后立即和72小时后，拍摄相差显微镜图像，并根据这些图像进行免疫细胞化学染色（鬼笔环肽）评价细胞形态，并通过测量细胞迁移面积评价细胞迁移能力。 Müller细胞在羊膜上皮侧延伸伪足，获得高纵横比的粘附图像，而在绒毛膜侧，获得圆形且低纵横比的粘附图像。在迁移实验中，上皮侧的迁移能力显着高于绒毛膜侧（t检验；p<0.05）。接下来，为了证实羊膜移植在体内的有效性，我们制作了兔视网膜裂孔模型，然后检查了对照组（无治疗组）和羊膜移植组（羊膜组）的组织修复过程。通过图像分析证实了差异。修复后将羊膜置入兔黄斑裂孔模型中，并在直径2 mm的孔内放入同直径的羊膜，成功获得术后OCT图像。

项目成果

期刊论文数量（2）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

眼科領域における羊膜移植の現状と展望

羊膜移植在眼科领域的现状与展望

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Miyazawa Kosuke;Sakimoto Susumu;Kanai Masanori;Shiraki Akihiko;Takahashi Shizuka;Shiraki Nobuhiko;Maruyama Kazuichi;Sakaguchi Hirokazu;Nishida Kohji;高橋静;田中　寛
通讯作者：
田中　寛

羊膜上で培養したヒトMuller細胞の形態と遊走能および接着能

羊膜培养人Muller细胞的形态、迁移和粘附能力