遺伝子ターゲッティング法を用いた紫外線高感受性修復欠損マウス系統の樹立

基因打靶法建立紫外线敏感修复缺陷小鼠品系

基本信息

批准号：
07780762
负责人：
原田良信
金额：
$ 0.7万
依托单位：
National Institute of Radiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至 1996
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度までの研究によりヒト色素性乾皮症G群原因遺伝子XPGのマウスホモログであるxpgのゲノミックDNAをクローニングし、マウスゲノミックDNAからそれぞれ異なったエクソンを不活性化する3種類(TV1,TV2,TV3)のターゲッティングベクターを作製した。TV2およびTV3の実験から得られた相同組み換え体と確認されたES細胞の中から、染色体数や形態が正常であると思われるクローンを選び、C578BL/6の初期胚にマイクロインジェクション法を用いて導入したところ、キメラマウスが誕生した。本年度の研究において、このキメラマウスをC57BL/6マウスと交配したところ、アグ-ティの毛色を持つ固体が誕生し、キメラマウスにおける変異xpg遺伝子の生殖線への移行が確認された。変異xpg遺伝子をヘテロに持つマウス同士の交配を行ったところ、仔マウスが誕生したが、その中に成長が著しく悪く、離乳時期までに死亡する固体が観察された。この矮小マウスはすべて変異xpg遺伝子をホモに持つマウス(以下ノックアウトホモマウス)で、正常マウスは変異xpg遺伝子をヘテロに持つまたは正常遺伝子ホモのマウスであった。矮小マウスと正常マウスとの分離比は1対3から有為な差は観察されず、ノックアウトホモマウスは発生途中で死亡することはないと考えられた。ノックアウトホモマウスの成長は著しく悪く、生後16日目における体重のは正常マウスの約1/3であった。今後このノックアウトホモマウスが離乳時期までに死亡する原因を明らかにして行く予定である。

通过截至去年的研究，我们克隆了人类着色性干皮病 G 群致病基因 XPG 的小鼠同源基因 xpg 的基因组 DNA，并开发了三种使不同外显子失活的小鼠基因组 DNA（TV1、TV2、We）。为 TV3 创建了一个目标向量）。在TV2和TV3实验中确认为同源重组体的ES细胞中，选择看起来具有正常染色体数目和形态的克隆并将其显微注射到早期C578BL/6胚胎中，当引入时，嵌合小鼠诞生。在今年的研究中，当这只嵌合小鼠与C57BL/6小鼠杂交时，一只具有aguti毛色的个体诞生了，证实了嵌合小鼠中的突变xpg基因被转移到种系中。当突变 xpg 基因杂合的小鼠杂交时，幼崽诞生了，但观察到其中一些幼崽生长极差，并在断奶时死亡。这些侏儒小鼠均为突变xpg基因纯合子（以下称为敲除纯合子小鼠），而正常小鼠要么为突变xpg基因杂合子，要么为正常基因纯合子。侏儒小鼠与正常小鼠的分离比例为1:3，因此没有观察到显着差异，表明纯合基因敲除小鼠在发育过程中不会死亡。敲除纯合子小鼠的生长情况极差，出生后第16天的体重约为正常小鼠的1/3。未来，我们计划阐明这些基因敲除纯合小鼠在断奶前死亡的原因。