遺伝子ターゲッティング法を用いた色素性乾皮症G群モデルマウス系統の樹立

基因打靶法建立着色性干皮病G组模型小鼠品系

基本信息

批准号：
08780807
负责人：
原田良信
金额：
$ 0.64万
依托单位：
National Institute of Radiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトの遺伝病である色素性乾皮症G群のマウスホモログであるxpg遺伝子のエクソンに突然変異を起こさせたターゲッティングベクターを用い、変異ESクローンを選択し、キメラマウスを得た。このキメラマウスをC57BL/6マウスと交配し、F1マウスを得た。F1マウスは外見上正常マウスと差異は認められず、またその細胞は紫外線に対し、高感受性にはなっていなかった。次にこのF1マウス同士を交配し、変異xpgマウスをヘテロに持つマウス、すなわち色素性乾皮症G群モデルマウスが誕生した(以下、このマウスをxpg欠損マウスと略す)。xpg欠損マウスは出生時は他の野生型、あるいはヘテロマウスと変わり無く生まれてくるが、その後の成長が著しく悪く、そのすべてが離乳期までに死亡した。産子の体重を計測したところ、xpg欠損マウスの平均体重は生後16日目で、野生型、あるいはヘテロマウスにくらべ2分の1から3分の1であった。死亡時期は生後10日目より23日目まで観察され、そのピークは16から19日目であると考えられた。ヘテロマウスは野生型との差異は観察されず、妊性も正常であると考えられた。次にxpg欠損マウスの胎児の細胞を採集し、紫外線に対する感受性を観察したが、高感受性であった。xpg遺伝子の転写をノーザンブロット法を用いて観察したが、全く発現されたいなかった。xpg欠損マウスの矮小化と離乳前に死亡する原因の1つとして、野生型、あるいはヘテロマウスとの競争、すなわちxpg欠損マウスの授乳行動が野生型、あるいはヘテロマウスによって妨げられていることが考えられた。そこで生後10日目に野生型、あるいはヘテロマウスと考えられるマウスを取り除く実験を行ったが、xpg欠損マウスは離乳前に死亡し、野生型、あるいはテヘロマウスとの競争はなく、それ自身に矮小化と離乳前に死亡する原因があると考えられた。

使用人类遗传病着色性干皮病G组的小鼠同源物xpg基因的外显子发生突变的打靶载体，选择突变型ES克隆，获得嵌合小鼠。将该嵌合小鼠与C57BL/6小鼠杂交，获得F1小鼠。 F1小鼠的外观与正常小鼠没有差异，它们的细胞对紫外线不高度敏感。接下来，将这些F1小鼠彼此杂交，产生具有杂合突变xpg小鼠的小鼠，即着色性干皮病G组模型小鼠（下文中，该小鼠将简称为xpg缺陷小鼠）。尽管xpg缺陷小鼠出生时与其他野生型或杂合小鼠没有什么不同，但它们随后的生长明显较差，并且在断奶时全部死亡。测量子代体重时，出生后第16天，xpg缺陷小鼠的平均体重是野生型或杂合子小鼠的1/2至1/3。死亡时间为出生后第10天至第23天，高峰期为第16天至第19天。杂合子小鼠与野生型小鼠之间没有观察到差异，其生育能力被认为是正常的。接下来，收集了xpg缺陷小鼠胎儿的细胞并观察了它们对紫外线的敏感性，发现它们具有高度敏感性。使用Northern blotting观察xpg基因的转录，但没有发现表达。 xpg缺陷小鼠在断奶前出现侏儒和死亡的原因之一被认为是由于与野生型或杂合小鼠的竞争，即xpg缺陷小鼠的哺乳行为受到野生型或杂合小鼠的阻碍完成了。因此，我们做了一个实验，我们在出生后第10天就将被认为是野生型或杂合子的小鼠剔除，但xpg缺陷的小鼠在断奶前就死亡了，无法与野生型或杂合子小鼠竞争，使自己变得矮小。这被认为是断奶前的死亡原因。