歯牙移動における完全型ならびに断片化オステオカルシン投与の効果に関する研究

完整和分段骨钙素给药对牙齿移动影响的研究

• 批准号: 07772034
• 负责人: 小林 泰浩
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772034/
• 关键词: 歯牙移動; オステオカルシン; 破骨細胞; 酒石酸耐性酸性ホスファターゼ; ラット

実験的歯牙移動に及ぼすオステオカルシン局所投与の影響を経時的に検索する目的で,エルジロイクローズドコイルスプリングを用いて,ラット上顎右側第1臼歯を30グラムの矯正力で近心方向に移動した.実験群としてオステオカルシン1μgをラット第1臼歯根分岐部にマイクロシリンジを用いて投与した.対照群としてはPBSを投与した.次に投与開始後,1,2,3,4,5日目に一群6匹ずつ屠殺した.通法に従い,上顎骨のパラフィン切片を作製し,破骨細胞のマーカーである酒石酸耐性フォスファターゼ染色を行った.両群ともに1日目では近心歯槽骨に破骨細胞は認められなかった.オステオカルシン投与群では対照群と比較して2日目,3日目に著明な破骨細胞の増加を認めた.一方,対照群ではオステオカルシン投与群に比べ,破骨細胞数は明らかに少なかった.また,破骨細胞の出現のピークも4日目とやや遅れていた.これらの結果からオステオカルシンの投与により局所の破骨細胞が増加し,歯牙移動の促進が起こったことが示唆された.次にこのオステオカルシンの効果をオステオカルシンに対する中和抗体で阻害できるかどうかを検討する目的でラットオステオカルシンアミノ末端20残基に対する抗体を作製した.オステオカルシンアミノ末端20残基(N20)を合成し,この合成ペプチドをKLHにコンジュゲートした.このN20-KLHをFCAと乳化させ,家兎に免疫した.得られた抗血清からラットオステオカルシンのN20ペプチドをリガンドとしたsepharose CL6Bカラムを作製し,抗N20IgGをアフィニティー精製した.この精製により,抗N20IgGを約10mg得ることができた.得られた抗体の特異性ならびにタイタ-はwesthm blottingで確認した.westhm blottingレベルで,2000倍希釈で十分検出可能である比較的タイタ-の高い抗体を得ることができた.

为了研究局部骨钙素给药对实验性牙齿随时间移动的影响，使用埃尔吉洛伊封闭螺旋弹簧以 30 克的正畸力将大鼠的右上颌第一磨牙近中移动作为实验组。使用微量注射器将骨钙素注射到大鼠第一磨牙的根分叉处。作为对照组，注射PBS。在开始喂养后第1、2、3、4和5天处死每组六只动物，根据标准方法制备上颌骨石蜡切片，并用抗酒石酸磷酸酶（破骨细胞标记物）染色。第一天，两组的近中牙槽骨中均未观察到破骨细胞。在骨钙素治疗组中，与对照组相比，第二天和第三天破骨细胞明显增加。与在对照组中，破骨细胞的数量明显低于骨钙素施用组。破骨细胞的峰值出现也稍微延迟，在第4天。这些结果表明，骨钙素施用可以减少局部破骨细胞。细胞增加并促进牙齿移动。接下来，我们研究了骨钙素的这种作用是否可以用针对骨钙素的中和抗体来抑制。为了本研究的目的，我们生成了针对大鼠骨钙素的 20 个氨基末端残基的抗体，我们合成了骨钙素 (N20) 的 20 个氨基末端残基，并将该合成肽与 KLH 进行了乳化。 FCA.用大鼠骨钙素的N20肽作为配体对兔子进行免疫。制备CL6B柱并亲和纯化抗-N20 IgG，通过该纯化可以获得约10mg的抗-N20 IgG。通过免疫印迹水平确认了所获得的抗体的特异性和效价。我们能够获得滴度相对较高的抗体，稀释 2000 倍即可充分检测到。

项目成果

Kobayashi Y.et.al.: "Processing of Osteocalcin by cysteine proteinases alters the intrinsic calcium binding capability." Dentistry Japan. 32(in press). (1995)

Kobayashi Y.et.al.：“半胱氨酸蛋白酶对骨钙素的加工改变了内在的钙结合能力。”