歯牙移動における完全型ならびに断片化オステオカルシン投与の効果に関する研究

完整和分段骨钙素给药对牙齿移动影响的研究

• 批准号: 07772034
• 负责人: 小林 泰浩
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772034/
• 关键词: 歯牙移動; オステオカルシン; 破骨細胞; 酒石酸耐性酸性ホスファターゼ; ラット

実験的歯牙移動に及ぼすオステオカルシン局所投与の影響を経時的に検索する目的で,エルジロイクローズドコイルスプリングを用いて,ラット上顎右側第1臼歯を30グラムの矯正力で近心方向に移動した.実験群としてオステオカルシン1μgをラット第1臼歯根分岐部にマイクロシリンジを用いて投与した.対照群としてはPBSを投与した.次に投与開始後,1,2,3,4,5日目に一群6匹ずつ屠殺した.通法に従い,上顎骨のパラフィン切片を作製し,破骨細胞のマーカーである酒石酸耐性フォスファターゼ染色を行った.両群ともに1日目では近心歯槽骨に破骨細胞は認められなかった.オステオカルシン投与群では対照群と比較して2日目,3日目に著明な破骨細胞の増加を認めた.一方,対照群ではオステオカルシン投与群に比べ,破骨細胞数は明らかに少なかった.また,破骨細胞の出現のピークも4日目とやや遅れていた.これらの結果からオステオカルシンの投与により局所の破骨細胞が増加し,歯牙移動の促進が起こったことが示唆された.次にこのオステオカルシンの効果をオステオカルシンに対する中和抗体で阻害できるかどうかを検討する目的でラットオステオカルシンアミノ末端20残基に対する抗体を作製した.オステオカルシンアミノ末端20残基(N20)を合成し,この合成ペプチドをKLHにコンジュゲートした.このN20-KLHをFCAと乳化させ,家兎に免疫した.得られた抗血清からラットオステオカルシンのN20ペプチドをリガンドとしたsepharose CL6Bカラムを作製し,抗N20IgGをアフィニティー精製した.この精製により,抗N20IgGを約10mg得ることができた.得られた抗体の特異性ならびにタイタ-はwesthm blottingで確認した.westhm blottingレベルで,2000倍希釈で十分検出可能である比較的タイタ-の高い抗体を得ることができた.

为了随着时间的推移寻找局部骨钙素给药对实验牙齿迁移的影响，使用Ergiroy封闭的线圈弹簧，大鼠的右手摩尔用30克的正畸力近距离移动。在实验组中，使用微刺龙将1μg的骨钙素施用到大鼠的第一个摩尔根分支。作为对照组，使用PBS。然后，在管理开始后的第1、2、3、4和5天处死了六只动物。制备上颌骨的石蜡切片，并用耐锈蚀磷酸酶（抗骨细胞的标志物）染色。在这两组中，在第1天，在肠肺肺泡骨中均未发现破骨细胞。在破骨细胞治疗组中，与对照组相比，在第2天和第3天观察到破骨细胞显着增加。另一方面，与对照组相比，在第2天和第3天，骨钙素治疗组的破骨细胞显着增加。与用骨钙素治疗的组相比，该组的破骨细胞数显然较小。在第四天，破骨细胞外观的峰值也略有延迟。这些结果表明，骨钙素的给药增加了局部破骨细胞，从而促进牙齿迁移。接下来，为了研究骨钙素的作用是否可以通过中和针对骨钙素的抗体抑制，制备了针对大鼠骨钙蛋白氨基末端的20种残基的抗体。合成了骨钙素氨基末端残基（N20），并将该合成肽结合到KLH。该N20-KLH用FCA和免疫兔子乳化。所得的抗血清是大鼠骨钙蛋白的N20肽作为配体的N20肽。制备了CL6B色谱柱，并纯化了抗N20igg。这种纯化使我们获得了大约10 mg的抗N20igg。通过Westhm印迹证实了获得的抗体和滴度的特异性。在WestHM印迹水平上，可以在2000倍稀释下检测到具有相对较高滴度的抗体。

项目成果

Kobayashi Y.et.al.: "Processing of Osteocalcin by cysteine proteinases alters the intrinsic calcium binding capability." Dentistry Japan. 32(in press). (1995)

Kobayashi Y.et.al.：“半胱氨酸蛋白酶对骨钙素的加工改变了内在的钙结合能力。”