牽引力による成熟破骨細胞のアポトーシス誘導機構の解析

牵引力诱导成熟破骨细胞凋亡机制分析

• 批准号: 09771846
• 负责人: 小林 泰浩
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771846/
• 关键词: 牽引力; 歯の移動; 破骨細胞; アポトーシス

歯の移動時に牽引側で観察される破骨細胞のアポトーシスの誘導機構に関して、実験を行った。in vivoの実験では、歯の移動後1日および2日目のパラフィン切片を作製し、一酸化窒素(NO)合成酵素であるNOS、プロスタグランディン合成酵素であるCOX,ならびに骨吸収刺激因子であるTNF-α,破骨細胞形成に必須のサイトカインであるM-CSFに対する抗体を用いて、免疫組織学的に検索を行った。さらに、破骨細胞のアポトーシスを誘導することが報告されているサイトカインであるTGF-βのin situ hybridazationを行った。その結果、歯の移動前と比較して、移動後1日目、2日目では、endothelialNOS(eNOs)の発現が牽引側の骨表面の細胞に強く認められた。また、TGF-βもeNOSと同様の部位に強く発現していることが、明らかとなった。TNF-α,M-CSFに関しては、牽引側で、その発現の著明な減少は認められなかった。以上から、牽引力による破骨細胞のアポトーシスには、NOならびにTGF-βが一部関与している可能性が示唆された。次に、培養破骨細胞を用いて、NOが破骨細胞のアポトーシスを誘導するかを確認した。NO発生剤として、NOC18(dojin)を用いた。ビタミンD3およびプロスタグランディンE2存在下で、6日間マウスの骨髄細胞と頭蓋冠由来の骨芽細胞様細胞を共存培養し、破骨細胞様細胞を得た。この破骨細胞を象牙切片上に播種し、0mMから1mMまでの用量でNOC18を添加した。その結果、100μM以下の濃度では破骨細胞のアポトーシスはほとんど誘導できなかった。しかし、400μM以上では、約80%の破骨細胞がアポトーシスを起こした。さらに、牽引側歯周組織において、高濃度のNOが産生されているか、検証する必要があると思われる。

对牙齿运动过程中牵引侧观察到的骨细胞凋亡的机制进行了实验。在体内实验中，在牙齿迁移后的第1和第2天准备了石蜡切片，并使用针对NOS的抗体进行免疫组织化学搜索，一氧化氮（NO）合酶，Cox，Prostaglandin Synthase，TNF-α，TNF-α，TNF-α，TNF-α，TNF-α，TNF-α，骨吸收刺激因子和M-CSF，用于cysf，cytokine cytokine cyertl shumotl。此外，进行了TGF-β的原位杂交，这是一种据报道诱导骨细胞凋亡的细胞因子。结果，与牙齿迁移前相比，在迁移后的第一和第二天，在牵引侧的骨表面的细胞中强烈观察到内皮NOS（ENOS）的表达。还揭示了TGF-β与eNOS在同一位置强烈表达。关于TNF-α，M-CSF，在牵引侧未观察到其表达的显着降低。从以上，建议NO和TGF-β可能部分参与由牵引力引起的破骨细胞凋亡。接下来，使用培养的破骨细胞来确认无诱导破骨细胞凋亡。 NOC18（DOJIN）用作NO发电机。在维生素D3和前列腺素E2的存在下共培养小鼠骨髓细胞和钙质衍生的成骨细胞样细胞6天，以获得骨细胞样细胞。将破骨细胞播种在象牙切片上，并以0 mm至1 mm的剂量加入NOC18。结果，在低于100μm的浓度下，破骨细胞凋亡几乎无法诱导。然而，在400μm或更多的情况下，大约80％的破骨细胞发生了凋亡。此外，似乎有必要验证是否在牵引牙周组织中产生高浓度的NO。