A.actinomycetecomcomitansの熱ショック蛋白質の研究

伴放线放线菌热休克蛋白的研究

• 批准号: 07771620
• 负责人: 松本 壮吉
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771620/
• 关键词: 熱ショック蛋白質; Dna K

我々は,A.actinomycetecomcomitans(A.a.)の染色体より,大腸菌の主要な熱ショック蛋白質,Dna K及び,ヒトの70kDa熱ショック蛋白質に相同性のある蛋白質の遺伝子を含む,2696bpのDNAフラグメントをクローニングし,その全塩基配列を決定した.この,DNAフラグメントには,70kDa熱ショック蛋白質以外に,大腸菌の熱ショック蛋白質Dna Jと相同性の高い蛋白質の,アミノ末端領域の塩基配列が見つかった.それは,70kDa蛋白質遺伝子の,カルボ末端側に存在していた.dna J遺伝子の上流には,プロモーターと考えられる塩基配列がなく,この2つの遺伝子は,一つのオペロンとして転写されるものと考えられた.70kDa蛋白質の遺伝子のアミノ末端が,一部,含まれていなかったため,上流領域の遺伝子のクローニングを試み,それをコードする遺伝子断片を含む,約3kbpのDNAフラグメントをクローニングし,その塩基配列を決定した.その結果,A.a.の70kDa蛋白質は,大腸菌のDna Kとアミノ酸で,83%の相同性があることが分かった.また,大腸菌のdna K遺伝子のプロモーター配列と似た配列が,70kDa蛋白質遺伝子上流に存在し,プロモーター配列と考えられた.それは,大腸菌でも認識される可能性が考えられたため,我々は,70kDa熱ショック蛋白質をコードする遺伝子,およびそのプロモーター配列を含むと考えられるDNA断片を,大腸菌のプラスミッドに挿入し,大腸菌内で発現するかどうかを検討したが,その発現は,検出できなかった.70kDa蛋白質の,歯周疾患との関連を検討するため,70kDa蛋白質を,発現用プラスミッドを用いて,大量に発現させ,その産物をカラムを用いて精製した.現在,患者由来のTリンパ球との反応を,免疫学的手法により検討中である.

我们克隆了一个2696 bp的DNA片段，该片段包含大肠杆菌，DNA K的主要热休克蛋白的基因和与人70 kDa热休克蛋白同源的蛋白质，并确定了整个碱基序列。除70 kDa热休克蛋白外，在该DNA片段中发现了与大肠杆菌热休克蛋白DNA J高度同源的蛋白的氨基末端区域。它在70 kDa蛋白基因的碳纤维侧发现。没有核苷酸序列可以被视为J基因上游的启动子，因此人们认为这两个基因被转录为一个操纵子。由于不包括70KDA蛋白基因的氨基末端，因此我们试图在上游区域克隆基因，并克隆了一个大约3KBP的DNA片段，该DNA片段包含编码它的基因片段，并确定了碱基序列。结果，发现A.A中的70kDa蛋白与大肠杆菌的DNA K同源为83％。此外，发现大肠杆菌的DNA在70kDa蛋白中。与K基因的启动子序列相似的序列存在于70KDA蛋白基因的上游，被认为是启动子序列。人们认为它可以在大肠杆菌中识别，因此我们插入了一个编码70kDa热休克蛋白的基因，并且被认为将其启动子序列含有大肠杆菌的质粒中含有启动子序列，并研究了它是否在大肠杆菌中表达，但未检测到其表达。为了研究70KDA蛋白与牙周疾病的关联，使用表达质粒大量表达了70KDA蛋白，并使用色谱柱纯化产物。目前，正在通过免疫学技术研究与患者的T淋巴细胞的反应。