ヒトマラリアの防御抗原を発現する組み換えBCGワクチンの作製

表达人类疟疾保护性抗原的重组卡介苗疫苗的生产

• 批准号: 13226100
• 负责人: 松本 壮吉
• 金额: --
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226100/
• 关键词: malaria vaccine; Recombinant BCG; MSP1; SERA

1.これまでに組み換えBCGのシステムを用いてPlasmodium falciparumのMSP1のC末端部をコードする遺伝子を組み入れた組み換えBCG菌を作製し、BCG菌からのMSP1-Cの分泌を確認した。またその構造は本来の立体構造に近い構造をとっていることも分かった。しかしながら分泌量に関してはまだ十分ではないことから、この抗原により誘導される防御免疫を高めるのは難しいものと考えられた。今回、発現量を増加させる対策として、MSP1-Cの遺伝子のコドンを抗酸菌型のコドンに適合させた人工の合成遺伝子を作製した。この合成遺伝子を用いて上記と同様にして組み換えBCG菌を作製し、BCGからのMSP1-Cの分泌量を検討したところ分泌量が上昇しているのが確認された。またMSP1-Cの発現領域を修正することによりBCGからの分泌量をさらに増加させることができた。2.SERA(SE47')は我々の発現システムを用いた場合、大量分泌系には適さない可能性が示されたことから、今回ストレス蛋白質であるHSP60及びα-crystallin like proteinのプロモーターを用いて菌体内の発現を目指した新しいベクターの構築を行い、BCGを形質転換した。得られた組み換えBCG菌からのSE47'の発現を検討したところ、BCG菌体内でのSE47'の発現が確認された。菌体内での発現はα-crystallin like proteinのプロモーターを用いた場合においてより多く発現しているのが確認された。次に、SE47'の発現が確認された組み換えBCG菌をマウスに投与し、抗体産生誘導能について検討した初回免疫後4週、8週、21週後の抗血清を用いて抗SE47'抗体価をABC-ELISA法で測定したところ、抗体価の上昇は認められなかった。

1。先前使用重组BCG系统制备了重组BCG细菌，该基因结合了法氏疟原虫MSP1的C末端部分的基因，并确认了BCG细菌的MSP1-C分泌。还揭示了该结构类似于原始的三维结构。但是，分泌量还不够，人们认为很难增加该抗原引起的保护性免疫。在本文中，作为提高表达水平的衡量标准，我们创建了一个人工合成基因，其中MSP1-C基因的密码子适应了分枝杆菌型密码子的密码子。使用该合成基因，以与上述相同的方式制备重组BCG细菌，当检查了MSP1-C从BCG的分泌时，确认分泌量增加了。此外，通过修改MSP1-C表达区域，可以进一步增加BCG的分泌量。 2。显示出使用我们的表达系统时血清（SE47'）可能不适合大规模分泌系统，因此我们使用了应激蛋白HSP60和α-晶状蛋白样蛋白的启动子，以创建旨在在细菌内表达的新载体，并转化BCG。检查了从获得的重组BCG细菌中SE47'的表达，并在BCG细胞中证实了SE47'的表达。人们证实，当使用α-晶状蛋白样蛋白的启动子时，细菌中的表达更加表达。接下来，对小鼠的重组BCG细菌进行了证实，并使用抗血清4、8、8和21周在初次免疫后使用ABC-ELISA方法测量了抗SE47'抗体滴度，该抗体产生了抗体产生的能力，并且没有观察到抗体的增加的能力。