タンパク質のミトコンドリア内仕分け機構に関与する新規酵母突然変異株の分離

分离参与蛋白质线粒体分选机制的新型酵母突变株

• 批准号: 06858077
• 负责人: 西川 周一
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06858077/
• 关键词: ミトコンドリア; 膜透過; 仕分け

ミトコンドリア膜間部タンパク質であるシトクロムb_2は,その局在化の過程で最後に膜間部においてプロセシングをうけるが,このステップの変異株(imp変異株)が温度感受性の呼吸欠損株として分離されている.そこで,膜間部タンパク質の仕分けの変異株を,まず温度感受性呼吸欠損株として分離した.酵母野性株をエチルメタンスルホン酸を用いて変異源処理し,約19,000個のコロニーをスクリーニングした結果,215株の温度感受性呼吸欠損株を得た.これらの株を制限温度下で培養後,細胞抽出液を調製し,SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動,抗シトクロムb_2抗体を用いたウェスタンブロットを行なった.この結果,制限温度下でシトクロムb_2の中間体が蓄積している株を1株,シトクロムb_2の前駆体が蓄積している株を4株得た.まず,制限温度下でシトクロムb_2の中間体を蓄積する1株について遺伝解析を行なった結果,この株はIMP1遺伝子に変異が生じており,膜間部タンパク質の仕分け機構の変異株ではないことが明らかとなった.一方,制限温度下でシトクロムb_2の前駆体を蓄積する株では,制限温度下においてF_1βタンパク質のような他のミトコンドリアタンパク質の前駆体の蓄積は観察はされなかった.このことは,これらの株はシトクロムb_2の局在化に特異的に欠損を持っていることを示唆している.そこで現在,これら4株についてさらに遺伝解析を進めている.これらの株の解析によって,シトクロムb_2の局在化機構に関与する因子が同定されることが期待される.

细胞色素b_2是一种线粒体膜间蛋白，在其定位过程中最终在膜间区域进行加工，而在该步骤中分离出一个突变株（imp突变株），作为温度敏感呼吸缺陷株。用于将膜间蛋白分选为温度敏感呼吸缺陷菌株的突变菌株。经过同种异体处理后筛选了约 19,000 个菌落，我们获得了 215 个温度敏感呼吸缺陷菌株。在限制温度下培养这些菌株后，制备细胞提取物并在 SDS 聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳和蛋白质印迹。结果表明，一株菌株在限制温度条件下积累了细胞色素b_2中间体。我们获得了4株积累细胞色素b_2前体的菌株。首先，我们对1株在限制温度下积累细胞色素b_2中间体的菌株进行了遗传分析，结果发现该菌株的IMP1基因发生了突变。另一方面，在限制性温度下积累细胞色素b_2前体的菌株中，F_1β蛋白并不是膜间蛋白分选机制中的突变菌株。未观察到蛋白质等其他线粒体蛋白前体的积累，表明这些菌株在细胞色素b_2定位方面存在特定缺陷，因此，我们目前正在对这四个菌株进行进一步的遗传分析。这些菌株将导致细胞色素b_2定位机制中涉及的因子的鉴定。

项目成果

西川周一: "Inhibition of endoplasic reticulum(ER)-to-Golgi transport induces relocalization of binding protein(BiP)within the ER to from the BiP bodies" Molecular Biology of the Cell. 5. 1129-1143 (1994)

Shuichi Nishikawa：“抑制内质网 (ER) 到高尔基体的运输会诱导 ER 内结合蛋白 (BiP) 重新定位，形成 BiP 小体”，《细胞分子生物学》5. 1129-1143 (1994)。

中井正人: "分子シャペロンhsp70とオルガネラ形成" 生化学. 67. 108-122 (1995)

Masato Nakai：“分子伴侣 hsp70 和细胞器形成”生物化学 67. 108-122 (1995)。

中野明彦: "Mutational analysis of the Sarl protein,a small GTPase which is essential for vesicular transport from the endoplasmic reticulum" Journal of Biochemistry. 116. 243-247 (1994)

Akihiko Nakano：“Sarl 蛋白的突变分析，一种对内质网囊泡运输至关重要的小 GTP 酶”《生物化学杂志》116. 243-247 (1994)。