品質管理による小胞体由来コンパートメント形成の分子機構と生理機能制御
通过质量控制内质网衍生区室形成的分子机制和生理功能控制
基本信息
- 批准号:16044219
- 负责人:
- 金额:$ 3.46万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:2004
- 资助国家:日本
- 起止时间:2004 至 2005
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
小胞体内腔のhsp70であるBiPは,小胞体品質管理において中心的な役割をはたしている。本年度は,AtBiP1遺伝子に関する優性欠損変異体を,花粉特異的なLAT52プロモーターを用いて発現するシロイヌナズナ形質転換体を作製し,その解析を行った。得られた形質転換植物は,花粉形成は正常であったが,BiP変異遺伝子の次世代への伝達に欠損を示した。in vitroおよびsemi in vitro花粉伸長実験の結果,BiP変異体を発現しても花粉は発芽し花粉管を伸長するが,花粉管が雌しべ柱頭と花柱を通過する過程に欠損が生じることが明らかとなった。本研究では,BiPのパートナータンパク質として機能する,小胞体のJタンパク質の解析も行った。本年度は,出芽酵母の小胞体Jタンパク質であるJem1p, Scj1p, Sec63pのシロイヌナズナホモログ(AtJem1, AtScj1A, AtScj1B, AtSec63A, AtSec63B)に対する抗体を作製し,これを用いた解析を行った。シロイヌナズナ培養細胞の細胞分画によって,これらJタンパク質が小胞体に局在することが示唆された。また,AtJem1,AtScj1A, AtScj1Bは膜内腔側のタンパク質であることが示された。また,これら遺伝子に関する破壊株の作製を行い,AtJem1,AtScj1A, AtScj1BとAtSec63B各遺伝子の単独の破壊,AtScj1AとAtScj1Bの2重破壊は致死とはならないが,AtSec63Aの遺伝子破壊は致死もしくは雄性不稔となることを示した。
BiP 是内质网腔中的 hsp70,在内质网质量控制中发挥核心作用。今年,我们使用花粉特异性 LAT52 启动子创建了表达 AtBiP1 基因显性缺失突变体的拟南芥转化体,并对其进行了分析。由此产生的转基因植物表现出正常的花粉形成,但在将 BiP 突变基因传递给下一代方面存在缺陷。体外和半体外花粉伸长实验结果表明,尽管表达了BiP突变体,花粉萌发且花粉管伸长,但花粉管穿过雌蕊柱头和花柱的过程出现缺陷。成为。在这项研究中,我们还分析了内质网 J 蛋白,它是 BiP 的伴侣蛋白。今年,我们生成了针对酿酒酵母内质网 J 蛋白、Jem1p、Scj1p 和 Sec63p 的拟南芥同源物(AtJem1、AtScj1A、AtScj1B、AtSec63A、AtSec63B)的抗体,并使用这些抗体对其进行了分析。培养的拟南芥细胞的细胞分级表明这些 J 蛋白定位于内质网。此外,AtJem1、AtScj1A 和 AtScj1B 被证明是膜内腔侧的蛋白质。此外,我们对这些基因创建了破坏菌株,发现AtJem1、AtScj1A、AtScj1B和AtSec63B基因的单次破坏以及AtScj1A和AtScj1B的双重破坏不是致命的,但AtSec63A的基因破坏是致命的或雄性不育的。表明
项目成果
期刊论文数量(11)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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