造精細胞を用いた顕微受精に関する発生工学的研究

生精细胞微受精的发育工程研究

• 批准号: 06780710
• 负责人: 小倉 淳郎
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780710/
• 关键词: 顕微授精; 核移植; 精細胞; 発生工学; 電気融合; 顕微授精; 核移植; 精細胞; 発生工学; 電気融合

1.円形精子細胞による顕微授精技術およびその産子作出法の改良円形精子細胞は、精子と同じ半数体の染色体を有しており、これを成熟卵子と電気融合させることにより、産子が得られることをマウスで明らかにしているが、融合率(受精率)は25%程度であった。本研究では、電気融合法よりも効率的である卵子細胞質内注入法を応用できるか検討を行った。その結果、細胞膜を侵襲せずに破ることを可能にするピエゾマニピュレーター(プリマハム製)の使用および顕微操作ステージを17-18℃に冷やすことが有効であることが判明し、これにより、卵子生存率80-90%、受精率70%という、電気融合よりもはるかに効率的な方法として確立された。現在、得られた胚の卵管への移植実験を行っている。これらの顕微授精技術を他の動物に応用する場合、円形精子細胞の確認が重要となる。このために、第二減数分裂間期で停止させたハムスターあるいはマウス卵子へ細胞を注入し、その染色体を検査する、という方法を確立した。これにより、モルモットの円形精子細胞がマウスなどに比べ、きわめて大型であることを確認した。2.精母細胞による顕微授精技術およびその産子作出法の開発精母細胞は、減数分裂前の四倍体の細胞である。そこで、これらを同じ四倍体である卵母細胞と授精させ、減数分裂、そして発生をさせることを検討した。卵母細胞は卵丘細胞と透明帯に硬く囲まれているが、酵素と酸性溶液処理により、これらを効率的に取り除けることが明らかになった。現在、電気融合法と卵子細胞質内注入法のどちらが良いか、検討中である。また、他の方法として、精母細胞を体外で円形精子細胞まで培養し、これを顕微授精に用いる技術の開発も行った初代培養、あるいは株化したセルトリ細胞いづれを共培養に用いても、精母細胞が円形精子細胞まで発生することを明らかにした。現在、このようにして得られた円形精子細胞が、子供に至るかどうか、検討中である。

1。使用圆形精子细胞改进的显微化技术及其产生出生的方法圆形精子细胞具有与精子相同的单倍体染色体，并且已经在小鼠中揭示了可以通过与成熟的卵电卵（融合率（受精率）获得的出生，但大约25％。在这项研究中，我们研究了是否可以应用一种比电渗效率更有效的环内注射方法。结果，发现使用压电操纵器（由Primaham制造），该压电膜可以在不浸润的情况下破碎细胞膜，并将微控制阶段冷却至17-18°C，该阶段比电溶液建立了比电溶液更有效的方法，其鸡蛋存活率为80-90％，肥料率为70％。目前，我们正在进行有关将所获得的胚胎植入输卵管的实验。在将这些微刺激技术应用于其他动物时，确认圆形精子细胞很重要。为此，建立了一种方法，其中将细胞注入仓鼠或小鼠卵中，这些仓鼠或小鼠卵在第二个减数分裂间相间被捕并检查了染色体。这证实了与小鼠相比，豚鼠的圆形精子非常大。 2。使用精子细胞及其生产方法的微启示技术的开发是前四倍体细胞。因此，我们用卵母细胞和减数分裂和发育调查了这些卵母细胞的授精结果。卵母细胞几乎不被积云细胞和Zona pellucida包围，但是酶和酸性溶液处理已被证明能够有效去除它们。当前，我们正在考虑电渗渗；胞质注射效果是否更好。还揭示了精子细胞甚至可以通过在体外培养圆形精子细胞并开发一种技术来微刺激或共培养Sertoli细胞来产生的精子细胞。目前，正在研究是否获得的圆形精子细胞是否会导致儿童。