培養精子細胞および精母細胞を用いた顕微受精と産子の作出に関する発生工学的研究

利用培养精子细胞和精母细胞进行微受精和后代生产的发育工程研究

基本信息

批准号：
08780808
负责人：
小倉淳郎
金额：
$ 0.64万
依托单位：
国立予防衛生研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780808/
关键词：
精子細胞精母細胞顕微授精マウス

项目摘要

本研究は、顕微授精技術を遺伝子導入動物作成や雄性不妊治療(野生動物、ヒト)への応用のために、精子細胞以前の精祖細胞(二倍体)や一次精母細胞(四倍体)の利用を目指したものである。そこで、1)精祖細胞あるいは一次精母細胞を精子細胞まで体外で培養する、あるいは2)一次精母細胞を直接顕微授精に用いる、の2点について研究を進めた。動物はいずれもマウスを用いた。1)精細胞培養技術の確立:生後10日令の雄マウスより精細胞を取り出し、1-2週間セルトリ細胞を含む精巣細胞と共培養した。この日令のマウスは、まだ精子細胞は発生していないので、培養後に円形精子細胞が観察されれば、これらはすべて体外で発生したものと考えられる。F12培養液にエピネフリンを添加することで、円形精子細胞が発生した。これらは、未受精卵子へ注入することにより、1Nの半数体染色体を観察することにより確認できた。よって、少なくとも第一減数分裂と第二減数分裂を連続的に体外で進ませることが可能になった。2)一次精母細胞による顕微授精技術の開発:a)四倍体の一次精母細胞核を未受精卵に注入し、時間をおいて卵子を発生させることにより、染色体を1/2にする。これを取り出し、同じことをもう一度行うことにより、染色体を1/4(すなわち精子と同じ半数体)にし、胚として発生させた。あるいは、b)同じ四倍体である卵母細胞と授精させ、減数分裂を終了させることにより、胚として発生させた。前者の方法は、染色体の形態的ダメ-ジがあったが、後者の方法では、正常な二倍体胚を得られることが明らかになった。しかし、胚盤胞まで発生した胚を偽妊娠マウスへ移植したが、産子は得られなかった。以上から、減数分裂前の一次精母細胞も顕微授精に用いられることが示された。

这项研究旨在利用植物前细胞（二倍体）和原发性精子细胞（四倍体）来创建转基因动物，并应用男性不孕治疗（野生动物，人类）。因此，我们对两个点进行了研究：1）精子细胞或原代精子细胞在外部对精子细胞进行培养，或者2）直接使用原发性精子细胞进行静脉授精。所有动物都是小鼠。 1）精子细胞培养技术的建立：从10天大的雄性小鼠中去除精子细胞，并与含有Sertoli细胞的睾丸细胞共培养1-2周。由于在当天的年龄的小鼠中尚未开发精子细胞，如果在培养后观察到圆形精子细胞，则认为所有这些细胞都已在体内产生。将肾上腺素添加到F12培养基中产生圆形精子细胞。通过注入未施用的卵，通过注入1N单倍体染色体来确认这些。这使得至少要允许第一和第二减数分裂在体外连续发展。 2）使用原发性精子细胞开发微启示技术：a）通过将四倍体的原代精子细胞核注入未施肥的卵并及时产生卵，可以减少染色体。将其删除并重复相同的东西，以使染色体1/4（即与精子相同的单倍体）并形成胚胎。或者，b）它们是通过与相同四倍体和结束减数分裂的卵母细胞接送为胚胎的。前一种方法具有染色体形态损害，但据显示，后一种方法可以获得正常的二倍体胚胎。但是，将已经发展为胚泡的胚胎植入了伪孕的小鼠中，但没有获得生育。从上面的角度来看，已经表明，在减数分裂之前的原代精子细胞也可以用于静脉授精。