老人斑形成におけるアミロイド前駆体蛋白からのβ蛋白形成過程の形態学的研究

老年斑形成中淀粉样前体蛋白形成β蛋白过程的形态学研究

基本信息

批准号：
06770775
负责人：
高橋正
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アルツハイマー型痴呆の老人斑形成におけるアミロイドβ蛋白とその前駆体蛋白(APP)の関係を解明するために、DAT脳の大脳皮質においてβ蛋白とAPPに対する抗体による免疫染色に加え、アミロイドP成分(AP)およびアポリポ蛋白Eに対する抗体を用いて免疫染色を行い、形態学的な検討を行った。今回用いた抗APP抗体は錐体細胞の細胞膜周囲と一部の老人斑周囲を薄染したが、老人斑での染色性は不明瞭でabnormal neuriteの形態的な確認は困難であった。使用した抗体の特性によるものとも考えられ、他の抗APP抗体を用いた免疫染色も施行したが同様の結果であり、組織の固定法自体からの検討が必要であると思われた。アミロイドβ蛋白とAPの関係については、mirror image法を用いた検討では各タイプの老人斑で両者の分布の大半が一致していることが示された。しかし、アミロイドβ蛋白の存在を調べるためにはギ酸処理が必要であるが、APの抗原性はギ酸処理により減弱するため、両者を同時に検討することは困難であった。そのため、今回は抗AP抗体に代わるものとして、APと同様に老人斑と神経原線維変化の両者に分布するアポリポ蛋白Eに対する抗体を使用した。アポリポ蛋白Eはギ酸処理による抗原性の変化が少ないといわれており、これを仲立ちとして、アミロイドβ蛋白その他の老人斑構成成分について形態学的な検討を進めたが、抗アポリポ蛋白E抗体と抗アミロイドβ蛋白抗体による二重染色を共焦点レーザー顕微鏡により検討したところ、両者は異なった分布を示しアポリポ蛋白Eの沈着がアミロイドβ蛋白の沈着・成長過程に反比例して存在する可能性を示す結果が得られた。

To clarify the relationship between amyloid β protein and its precursor protein (APP) in the formation of senile plaques in Alzheimer's type dementia, immunostaining was performed using antibodies to β protein and APP in the cerebral cortex of the DAT brain, as well as antibodies to amyloid P component (AP) and apolipoprotein E, and morphological examination was conducted.这次使用的抗APP抗体被用来对锥体细胞和某些老年斑块细胞膜的周围环境微微染色，但是老年斑块的染色特性尚不清楚，因此难以确认异常神经蛋白的形态。人们认为这是由于所使用的抗体的特征，并且还进行了使用其他抗APP抗体进行免疫染色，但结果相似，并且似乎需要从组织固定方法中进行检查。关于淀粉样蛋白β蛋白与AP之间的关系，使用镜像方法的研究表明，两者的大部分分布在老年斑块中都是一致的。然而，需要甲酸处理以研究淀粉样β蛋白的存在，但是通过甲酸处理降低了AP的抗原性，因此很难同时研究这两者。因此，在本文中，我们使用了针对载脂蛋白E的抗体，该抗体像AP一样分布在老年斑块和神经原纤维缠结中。据说，载脂蛋白E因甲酸治疗引起的抗原性几乎没有变化，并将其用作介体，我们对淀粉样蛋白β蛋白和其他老年斑块成分进行了形态学检查。使用抗磷脂蛋白E抗体和抗淀粉样蛋白β蛋白抗体进行双重染色时，使用共聚焦激光显微镜检查，两者显示出不同的分布，并表明可能存在于与淀粉样蛋白β蛋白的沉积和生长过程相反的情况下存在载脂蛋白E的可能性。