ジフテリア毒素リセプターの機能をモジュレートする細胞側因子の解析

调节白喉毒素受体功能的细胞因素分析

• 批准号: 06770213
• 负责人: 岩本 亮
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770213/
• 关键词: ジフテリア毒素; HB-EGF; DRAP27; CD9; リセプター

本研究は、ジフテリア毒素のリセプターとの結合及び細胞内侵入における細胞側の因子、特にリセプターとアソシエ-トする膜蛋白質DRAP27に焦点を当て、DRAP27の毒素リセプターに対する機能の解析を目的とした。毒素非感受性でDRAP27を発現していないマウスL細胞に、毒素リセプター(HB-EGF)のみ、又は毒素リセプター(HB-EGF)とDRAP27の両方を強制発現させ、各々の細胞について比較検討を行った。まず、DRAP27の発現によって、細胞表面へのジフテリア毒素の結合数並びに毒素感受性が著しく上昇することを確認した。この時毒素とリセプターとの間のアフィニティーには変化は見られなかった。また、HB-EGFとDRAP27のタイトなアソシエーションが、免疫共沈降と化学架橋試薬を用いて示された。次に、DRAP27の発現による細胞の毒素結合数上昇が何に起因するかを検討したところ、HB-EGFのmRNA発現量、蛋白の寿命、HB-EGFの分泌量には差が見られなかった。さらには、抗HB-EGF抗体を用いた細胞表面への結合実験等から、DRAP27の発現の有無によって、細胞表面上のHB-EGF分子の数そのものにも差が見られないことが分かった。即ちこれらのことから、DRAP27は膜結合型のHB-EGFと細胞表面でタイトにアソシエ-トすることによって、HB-EGFを機能的な毒素リセプターに変換していることが示された。現在このメカニズムについてさらに詳しく解析中である。

这项研究的重点是黑喉毒素的结合和细胞内侵袭的细胞因子，尤其是与受体相关的膜蛋白Drap27，旨在分析Drap27对毒素受体的功能。无毒素敏感且未表达DARAP27的小鼠L细胞被迫表达毒素受体（HB-EGF）或毒素受体（HB-EGF）和DRAP27，并比较并测试每个细胞。首先，已经证实，Drap27的表达显着增加了白喉毒素与细胞表面结合的数量和毒素的敏感性。目前，毒素和受体之间的亲和力尚未观察到任何变化。此外，使用共免疫沉淀和化学交联试剂证明了HB-EGF和DRAP27的紧密关联。接下来，我们研究了导致DARAP27表达引起的细胞中毒素结合的增加，发现HB-EGF，蛋白质寿命或HB-EGF分泌水平的mRNA表达水平没有差异。此外，从使用抗HB-EGF抗体的细胞表面结合实验中，发现细胞表面本身的HB-EGF分子数量在细胞表面本身上没有差异，具体取决于是否表达了Drap27。因此，这些结果表明DARAP27通过与细胞表面上的膜结合的HB-EGF紧密相关，将HB-EGF转换为功能性毒素受体。目前，该机制正在进行更详细的研究。