プロテインホスファターゼ2Aの74KDの調節サブユニットδのcDNAクローニング

蛋白磷酸酶 2A 74KD 调节亚基 δ 的 cDNA 克隆

基本信息

批准号：
06770107
负责人：
田邉修
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770107/
关键词：
プロテインホスファターゼ2A 調節サブユニットδ cDNA

项目摘要

プロテインホスファターゼ2A(PP2A)は真核生物に広く分布するセリン・トレオニンホスファターゼである。ヒト赤血球のPP2Aは、32kDの触媒サブユニット(α)と63kD(β)、53kD(γ)、74kD(δ)の三種類の調節サブユニットの組み合わせで構成されており、α_1β_1、α_1β_1γ_1、α_1β_1δ_1の三種類のホロ酵素が存在する。このうち74kDのδサブユニットは当研究室において発見された新しい調節サブユニットであり、この酵素の種々の基質に対する活性を抑制することが明らかになっている。本研究においては、すでに決定したδサブユニットの部分アミノ酸配列に基づいてデジェネレートなオリゴヌクレオチド・プライマーを生成し、HeLa細胞より合成したcDNAを鋳型としてPCRを行うことによりδサブユニットをコードする0.5kbのcDNA断片を単離した。次にこのcDNA断片をプローブとして、ヒト骨髄由来のλgt11cDNAライブラリー50万クローンをスクリーニングして2個の陽性クローンを単離し、さらにヒト大脳由来のλZAPcDNAライブラリー30万クローンをスクリーニングして6個の陽性クローンを単離した。このうちδサブユニットの全長をコードすると思われる、大脳由来の、2.9kbのインサートを有するクローンよりその塩基配列を決定した。これから明らかになったδサブユニットの一次構造は、これまでに報告されている他のサブユニットとは類似性を有しておらず、このサブユニットが他とは異なる独自の機能を有するものであると推測される。

蛋白磷酸酶2A（PP2A）是一种广泛分布于真核生物中的丝氨酸-苏氨酸磷酸酶。人红细胞的PP2A由32kD的催化亚基（α）和三种类型的调节亚基：63kD（β）、53kD（γ）和74kD（δ）组合而成，共有三种类型的全酶。其中，74kD delta亚基是我们实验室发现的一个新的调节亚基，已被证明可以抑制该酶对多种底物的活性。在本研究中，我们根据先前确定的δ亚基的部分氨基酸序列生成了简并寡核苷酸引物，并以HeLa细胞合成的cDNA为模板进行PCR，生成编码δ亚基的0.5 kb基因片段。孤立。接下来，使用该cDNA片段作为探针，筛选人骨髓来源的λgt11 cDNA文库的500,000个克隆，分离出2个阳性克隆，并筛选人大脑来源的λZAP cDNA文库的300,000个克隆，分离出6个阳性克隆。分离出阳性克隆。其中，核苷酸序列是从含有来自大脑的 2.9 kb 插入片段的克隆中确定的，该插入片段被认为编码 δ 亚基的全长。已揭示的δ亚基的一级结构与迄今为止报道的其他亚基没有相似性，并且该亚基具有与其他亚基不同的独特功能。