細胞分裂期におけるプロテインホスファターゼ2Aの機能

蛋白磷酸酶2A在细胞分裂过程中的功能

基本信息

批准号：
11143210
负责人：
田邉修
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

プロテインホスファターゼ2A(PP2A)は,触媒サブユニットCと調節サブユニットAとが結合したヘテロ2量体,あるいはこれに調節サブユニットのB,B',またはPR72が結合した3量体として存在する。分裂酵母をモデル生物として用いてB'サブユニットの機能解析を行った。分裂酵母より2種類のB'ホモログを見いだし,その遺伝子(pbp1^+,pbp2^+)の破壊株を作成した。pbp1^+遺伝子破壊株(Δpbp1)では,低温および高温感受性の生育障害が認められ,septumをもつ細胞の増加がみられた。pbp1^+とpbp2^+の二重破壊株では生育障害が顕著となるとともに,septumをもつ細胞はさらに増加し,multi-septumの細胞が出現した。この結果は,これらの変異株において細胞質分裂の遅延があることを示している。また,二重破壊株では無核の細胞の出現が認められ,有糸分裂における染色体の分配の障害と考えられた。これに対して,分裂酵母の野生株にpdp1^+を過剰発現させると増殖障害,細胞の球状化,septumをもつ細胞の増加,無核の細胞の出現などが見られた。これらの結果から,pbp1^+とpbp2^+は,細胞の生存と増殖,細胞形態の制御,細胞質分裂,染色体の分配などにおいて重要な役割を担うことがわかった。二重破壊株の表現型は,ヒトB'cDNAの導入によりレスキューされたことから,B'の機能が進化の過程で高度に保存されていることもわかった。次に,このようなB'の機能の分子的基盤を明らかにする目的でB'に結合する蛋白を酵母Two-Hybrid法により探索した。ヒト大脳皮質cDNAライブラリーより120万クローンをスクリーニングした結果,22個の陽性クローンが得られた。これらのクローンの解析からB'と細胞骨格系の制御因子との物理的相互作用が明らかになった。

蛋白质磷酸酶2a（PP2A）作为与催化亚基C和调节亚基A的异二聚体或与调节亚基B，B'或pr72结合的三聚体。使用裂变酵母作为模型生物进行B'亚基的功能分析。从裂变酵母中发现了两种类型的B'同源物，并破坏了基因菌株（PBP1^+，PBP2^+）。 PBP1^+基因破坏菌株（ΔPBP1）表现出低温和高温敏感的生长障碍，并增加了隔膜的细胞数量。在PBP1^+和PBP2^+的双层损害菌株中，生长障碍变得更加明显，并且含隔隔细胞的数量进一步增加，并且出现了多乳腺细胞。该结果表明这些突变体的细胞因子延迟。此外，在双层菌株中观察到了无核细胞的出现，这被认为是有丝分裂过程中染色体分布的损害。另一方面，裂变酵母菌野生菌株中PDP1^+的过表达显示出扩散疾病，细胞光光，含中隔隔隔中的细胞数量增加以及核酸菌细胞的出现。这些结果表明，PBP1^+和PBP2^+在细胞存活和增殖，细胞形态调节，细胞因子，染色体分布等中起着重要作用。双重菌株的表型通过人类B'CDNA的引入挽救了，并且还揭示了B的功能在进化过程中得到高度保存。接下来，为了阐明B'的该功能的分子基础，通过酵母两杂化方法搜索了与B'结合的蛋白质。筛选来自人类皮质cDNA文库的120万克隆导致22个阳性克隆。对这些克隆的分析揭示了B'和细胞骨架调节剂之间的物理相互作用。