プロテインホスファターゼ2Aの74KD調節サブユニットδの一次構造解析

蛋白磷酸酶2A 74KD调节亚基δ的一级结构分析

基本信息

批准号：
07770084
负责人：
田邉修
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

プロテインホスファターゼ2A(PP2A)は真核生物に広く分布するセリン・スレオニンホスファターゼである。ヒト赤血球のPP2Aは,34kDaの触媒サブユニット(α)と63kDa(β),53kDa(γ),74kDa(δ)の3種類の調節サブユニットから構成されており,α_1β_1,α_1β_1γ_1,α_1β_1δ_1の3種類のホロ酵素が存在する。74kDaのδは,この酵素の種々の基質に対する活性を抑制するが,Aキナーゼによりリン酸化されることによりその抑制作用が減弱する。本研究において,私たちはヒトPP2AのδサブユニットのcDNAを単離して,その一次構造を明らかにした。まず,ヒト赤血球よりδを純化し,その部分アミノ酸配列に基づいて,ヒト大脳皮質および骨髄のcDNAライブラリーからδをコードするcDNAを単離した。このcDNAの塩基配列から,δは570個のアミノ酸からなる分子量66万の蛋白質であると推定された。推定されたδの一次構造には,ウサギのPP2Aの52.5kDaのB′サブユニットおよびヒトのB56蛋白質との類似性が認められたが,PP2Aの他のサブユニットとの類似性は認められなかった。また,ホモロジー探査の結果,δが出芽酵母のRTS1(rox3サプレッサー)遺伝子産物ときわめて高い類似性を有することがわかった。δにはAキナーゼ,Cキナーゼによるリン酸化のコンセンサス配列が存在し,N末端付近にはプロリン,グルタミンの繰り返し配列,C末端付近には核移行シグナルのコンセンサス配列,およびSH3ドメインとの結合サイトのコンセンサス配列が存在した。ラットの各組織におけるδのmRNAの発現をノーザン・ブロット方により検討したところ,脳,心,肝,脾,骨格筋など検索したすべての組織において約2.9kbのmRNAの発現を認めた。

蛋白磷酸酶2A（PP2A）是一种广泛分布于真核生物中的丝氨酸-苏氨酸磷酸酶。人红细胞的PP2A由34 kDa的催化亚基（α）和63 kDa（β）、53 kDa（γ）和74 kDa（δ）三种调节亚基组成，三种调节亚基：α_1β_1、α_1β_1γ_1、α_1β_1δ_1 有几种全酶。 74kDa δ 抑制该酶针对各种底物的活性，但其抑制作用会因 A 激酶的磷酸化而减弱。在本研究中，我们分离了人PP2A δ亚基的cDNA并揭示了其一级结构。首先，我们从人红细胞中纯化δ，并根据其部分氨基酸序列，从人大脑皮层和骨髓cDNA文库中分离出编码δ的cDNA。从该cDNA的碱基序列推测δ是由570个氨基酸组成、分子量为66万的蛋白质。预测的 δ 一级结构与兔 PP2A 和人 B56 蛋白的 52.5 kDa B' 亚基相似，但与 PP2A 的其他亚基没有相似性。此外，同源性探索发现δ与酿酒酵母的RTS1（rox3抑制子）基因产物具有极高的相似性。 δ 具有 A 激酶和 C 激酶磷酸化的共有序列、N 末端附近的脯氨酸和谷氨酰胺重复序列、C 末端附近的核输入信号的共有序列以及 SH3 结构域 A 的结合位点。存在共有序列。当我们通过Northern blotting检测不同大鼠组织中δ mRNA的表达时，我们发现在所有搜索的组织中都有大约2.9 kb mRNA的表达，包括脑、心脏、肝脏、脾脏和骨骼肌。