新しいタイプのDNA結合蛋白質JκRBPの機能の解析

新型DNA结合蛋白JκRBP的功能分析

• 批准号: 06770082
• 负责人: 古川 貴久
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770082/
• 关键词: DNA結合蛋白質; 神経発生; ニューロジェニックジーン; 転写因子; EBウイルス; 発癌

我々はRBP-Jκ遺伝子を発現ベクターに組み込み、RBP-Jκ蛋白を発現誘導できるトランスジェニックフライを作成した。この形質転換体にRBP-Jκ蛋白質の過剰発現を誘導したところ、神経芽細胞がなくなり、RBP-Jκ遺伝子はニューロジェニックジーンとしての機能を有することが判明した。上皮芽細胞となる細胞膜上には、ニューロジェニックジーンのひとつであるNotch蛋白質が神経芽細胞からのシグナルを受け取る。遺伝学的および細胞生物学的解析より、RBP-Jκ遺伝子産物がNotchのシグナル伝達系において細胞膜から核へシグナルを伝えることが報告された。我々は酵母ツ-ハイブリッドシステムを用いて、Notch蛋白質とRBP-Jκ蛋白質の会合がショウジョウバエの変位体において変化していることを証明した(投稿中)。また、我々はRBP-Jκ蛋白質の結合性の高いDNA配列がC/TGTGGGAAであることを見いだした。RBP-Jκ蛋白質はこの配列に強く結合し転写を活性化した。さらに、遺伝学的解析によりRBP-Jκ蛋白質と拮抗する機能をもつと考えられてきたHairless蛋白質は、RBP-Jκ蛋白質の転写活性能を強く抑制することも示した。我々はニューロジェニックジーンのシグナル伝達系の最終ステップで働くE(spl)m8のプロモーター領域にRBP-Jκ蛋白質の結合配列を発見し、RBP-Jκ蛋白質がこのプロモーターをin vitroおよびin vivoともに活性化することを示した。(投稿中)。ヒト上咽頭癌の原因ウイルスであるEBウイルスがコードする種々の遺伝子産物のうちEBNA2はBリンパ球が不死化するのに必須の役割を果たす。我々がクローニングしたヒトRBP-Jκ蛋白質はEBNA2と協同でCD23,CD21などの遺伝子の転写を活性化することを証明した。発生やリンパ球の活性化の過程においてもRBP-Jκ蛋白質はEBNA2に相当する細胞因子と会合して様々なイフェクター遺伝子の転写を制御しているものと考えられる。実際にその因子を同定すべく我々はtwo-hybrid systemを用いてマウスembryoからRBP-Jκ蛋白質に会合する蛋白質をスクリーニングし複数個の候補を得ている。

我们将RBP-Jκ基因掺入表达载体中，以创建可以诱导RBP-Jκ蛋白表达的转基因蝇。当这种转化剂诱导RBP-Jκ蛋白的过表达时，消除了神经细胞，发现RBP-Jκ基因起神经源基因的作用。在变成上皮爆炸的细胞膜上，Notch蛋白是神经源基因之一，从神经细胞中接收信号。遗传和细胞生物学分析报告说，RBP-Jκ基因产物从细胞膜传输信号到Notch信号系统中的细胞核。我们证明了使用酵母T-杂交系统将Notch蛋白与果蝇位移中的RBP-Jκ蛋白相关联（在发布）中。我们还发现，RBP-Jκ蛋白的高度结合DNA序列是C/TGTGGGAA。 RBP-Jκ蛋白与该序列强烈结合并激活转录。此外，已经表明，被认为通过遗传分析具有拮抗RBP-Jκ蛋白的功能的无毛蛋白，强烈抑制了RBP-Jκ蛋白的转录活性能力。我们在E（SPL）M8的启动子区域中发现了RBP-Jκ蛋白的结合序列，后者在神经源基因信号系统的最后一步中起作用，表明RBP-Jκ蛋白在体外和体内都激活了该启动子。 （正在进行中）。在由EB病毒编码的各种基因产物（负责人鼻咽癌的病毒）中，EBNA2在B淋巴细胞的永生化中起着至关重要的作用。我们证明了人RBP-Jκ蛋白与EBNA2克隆以激活CD23和CD21等基因的转录。人们认为，在发育和淋巴细胞激活过程中，RBP-Jκ蛋白与对应于EBNA2相对应的细胞因子并调节各种效应基因的转录。为了实际识别这个因素，我们使用两杂交系统筛选了与小鼠胚胎中RBP-Jκ蛋白相关的蛋白质，并获得了多个候选物。

项目成果

U.Zimber-Strobl: "Epstein-Barr virus nuclear antigen 2 exerts its transactivating function through interaction with recombination signal binding protein RBP-Jκ,the homologue of Drosophila Suppressor of Hairless" EMBO J.13. 4973-4982 (1994)

U.Zimber-Strobl：“Epstein-Barr 病毒核抗原 2 通过与重组信号结合蛋白 RBP-Jκ（无毛果蝇抑制因子的同源物）相互作用发挥其反式激活功能”EMBO J.13 (1994)。

T.Furukawa: "Genetic characterization of Drosophila RBP-Jκ(Suppressor of Hairless)as a neurogenic gene in adult PHS development." Jap.J.Genet.69. 701-711 (1994)

T.Furukawa：“果蝇 RBP-Jκ（无毛抑制基因）作为成人 PHS 发育中神经源性基因的遗传特征。Jap.J.Genet.69 (1994)。