ライコムギに導入されたDゲノム染色体断片の分子細胞遺伝学的手法による検出

使用分子细胞遗传学方法检测引入小黑麦的 D 基因组染色体片段

基本信息

批准号：
06760008
负责人：
武田真
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760008/
关键词：
コムギライムギ染色体転座

项目摘要

本研究ではパンコムギとの交雑を経て育成されたライコムギ系統を蛍光in situハイブリダイゼーション法によって解析し,Rゲノム染色体とDゲノム染色体との間の転座染色体を検出することを試みた.まず,3D染色体短腕と3R染色体長腕とからなる転座染色体のin situハイブリダイゼーション法による検出を試みた.ライムギ(Secale cereale,Rゲノム)とDゲノムの提供親であるタルホコムギ(Aegilops squarrosa)それぞれの全DNAを抽出し,RあるいはDゲノムいずれかの全DNAをビオチンで標識し,他方の全DNAを無標識のまま約50倍量加えてin situハイブリダイゼーションを行ったところ,転座染色体を明瞭に検出できた.つぎに,染色体対合の分析から転座を持つことはわかっているが,転座点が同定できていないライコムギ系統Bronco 90をin situハイブリダイゼーション法で解析した。タルホコムギの全DNAをビオチン標識しライムギの全DNAを無標識のまま加えてin situハイブリダイゼーションを行ったところ,1対のライムギ染色体の長腕の末端よりの約1/10の部分にシグナルが認められ,この部分がDゲノム由来であることがわかった.しかし,逆の標識を行った場合にはこの転座は検出できなかった.したがって,in situハイブリダイゼーション法は,プローブの標識を適切に行えば,微少な転座でも切断点を正確に同定できることが明らかになった.

在这项研究中，我们通过荧光原位杂交分析了通过与面包小麦杂交生长的小黑麦品系，并试图检测R基因组染色体和D基因组染色体之间的易位染色体。染色体和3R染色体长臂的原位杂交。当通过提取每个R或D基因组的总DNA进行原位杂交时，用生物素标记R或D基因组的总DNA，并添加约50倍量的其他未标记的总DNA，转移我们能够清楚地检测到染色体位点。接下来，我们分析了小黑麦品系Bronco 90，从染色体配对分析得知该品系存在易位，但使用原位杂交无法识别易位点。当通过生物素标记Aruho小麦的总DNA并添加未标记的黑麦总DNA进行原位杂交时，在一对黑麦染色体的长臂末端的约1/10处观察到信号。发现易位源自D基因组，然而，当进行反向标记时，无法检测到这种易位。很明显，如果探针被适当标记，原位杂交方法即使是微小的易位也可以准确地识别断点。