分子細胞学的手法による新たなオオムギ染色体マーカーの創出

使用分子细胞学方法创建新的大麦染色体标记

基本信息

批准号：
07760004
负责人：
武田真
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760004/
关键词：
オオムギ染色体分染法 in situハイブリダイゼーション

项目摘要

本研究では、オオムギの新たな染色体マーカーを分染法および分子細胞学的手法によって創出することを試みた。まず、野生オオムギ(Hordeum spontaneum)および栽培オオムギ(Hordeum vulgare)を各3系統供試し、C-分染法によるバンドパターンの変異を調査した。その結果、野生オオムギは3系統とも第5染色体短腕の中部に栽培オオムギではみられない鮮明なバンドを持つことが明らかになった。野生オオムギと栽培オオムギとのF_1雑種の減数分裂第一中期の染色体をC-分染したところ、野生オオムギと栽培オオムギの第5染色体短腕間で正常に対合することがわかった。このことから野生オオムギの第5染色体短腕のバンドは構造異常ではなく、多型によって生じたものであることが明らかになった。次に、同一の染色体核板に対して分染とゲノミックin situハイブリダイゼーションを連続的に行う方法を、四倍性コムギの一種であるTriticum abyssinicumを材料として検討した。その結果、先にin situハイブリダイゼーションを行った標本をひき続いてN-分染する方法では、鮮明なN-分染像を得ることができなかった。しかし、先にN-分染を行い、脱染色してin situハイブリダイゼーションすると、良好なシグナルが得られることが明らかになった。さらに、コムギにオオムギ染色体が添加された系統を供試し、ゲノミックin situハイブリダイゼーション法を適用した。コムギの全DNAを無標識とし、オオムギの全DNAをビオチンで標識し、両者を約25:1の濃度比で混合したものをプローブとし、染色体標本にin situハイブリダイゼーションさせ、シグナルを蛍光検出した。その結果、オオムギ染色体とコムギ染色体を識別することができた。現在、混合する濃度比を変化させ、バンド状のパターンが得られないかどうかを検討している。

在这项研究中，我们尝试使用差异染色和分子细胞学方法创建新的大麦染色体标记。首先，使用野生大麦(Hordeum spontaneum)和栽培大麦(Hordeum vulgare)各3个品系，并使用C-分割方法研究条带图案的变化。结果显示，所有三个野生大麦品系在 5 号染色体短臂中部都有一条明显的带，这在栽培大麦中是看不到的。对野生大麦与栽培大麦杂交体F_1减数分裂中期染色体进行C染色显示，野生大麦与栽培大麦的5号染色体短臂配对正常。这些结果表明，野生大麦第5号染色体短臂上的条带不是由结构异常引起的，而是由多态性引起的。接下来，我们研究了一种使用四倍体小麦 Triticum abyssinicum 在同一染色体核板上依次进行差异染色和基因组原位杂交的方法。结果，通过对先前进行了原位杂交的样本依次进行N-差异染色，不可能获得清晰的N-差异染色图像。然而，很明显，如果首先进行N-差异染色，然后脱色和原位杂交，可以获得良好的信号。此外，我们测试了将大麦染色体添加到小麦中并应用基因组原位杂交的菌株。小麦总DNA未标记，大麦总DNA用生物素标记，两者浓度比约为25:1的混合物作为探针，对染色体标本进行原位杂交，通过荧光检测信号.结果，我们能够区分大麦染色体和小麦染色体。我们目前正在研究是否可以通过改变混合浓度比来获得带状图案。