ウズラsilver変異を用いた網膜再生機構の研究

鹌鹑银突变研究视网膜再生机制

基本信息

批准号：
06780625
负责人：
餅井真
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780625/
关键词：
silver変異ウズラ色素上皮細胞 mi遺伝子

项目摘要

鳥類における網膜再生研究のモデルシステムとなる、ウズラsilver変異における色素上皮細胞の分化状態の解析と、変異の原因遺伝子の探索を行い、以下のような結果を得た。1.silver変異体では、すでに報告されているとうり、5日目胚から色素上皮層の一部が厚くなり、神経網膜層に変わる。神経網膜層に変化しない部分の色素上皮層は野性型と比較して著しく色素化が悪いが、電顕観察したところ、色素顆粒の数が著しく少なく、顆粒自体の発達も不完全であることがわかった。このことから、silver変異が色素合成酵素の変異ではないことが予想された。2.silver変異体の色素上皮細胞について、色素上皮細胞の分化マーカーであるMMP115,tyrosinase,TRP-1,pP344についてその発現をノーザンブロット解析したところ、いずれも野生型と同じ分子量の転写産物が検出されたが、その量は若干少なかった。3.マウスmicrophthalmia変異の原因遺伝子であり、色素上皮細胞の分化を制御することが示唆されるmi遺伝子のウズラホモログについて、野生型とsilverとでその発現を比較したところ、silver変異の色素上皮細胞では、野生型と同じ分子量の産物が転写されるが発現量が多いことがわかった。4.サザンブロットにより、silver変異とmi遺伝子との関係を解析した結果、野生型で検出される約4.0kbのHind3断片が、silver変異では約4.5kbに変化することが明らかとなった。5.silver変異体の色素上皮細胞からmi遺伝子のcDNAを単離し、そのシーケンスを野生型と比較したところ、silver変異体では、miタンパク質の塩基性領域にあるヒスチヂンがアルギニンに変化し、さらにC端近くの77アミノ酸が欠損していることが明らかとなった。以上のことから、silver変異では、色素上皮細胞の分化を支配すると考えられるmi遺伝子に変異が生じることにより、眼杯外層が色素上皮ではなく内層と同様に神経網膜へと分化したものと推定できる。

我们分析了鹌鹑银突变中色素上皮细胞的分化状态，鹌鹑银突变是一种用于鸟类视网膜再生研究的模型系统，并搜索了负责突变的基因，并获得了以下结果。如已经报道的，在银突变体中，色素上皮层的一部分在第5天从胚胎变厚，并转化为神经视网膜层。在色素沉着中，色素上皮层没有变成神经视网膜层的变化明显比野生型要差，但是电子显微镜观察表明，色素颗粒的数量明显较小，颗粒的发育本身不完整。这预测银突变不是色素合酶的突变。 2。当MMP115，酪氨酸酶，TRP-1和PP344的表达时，通过北印迹分析分析了色素上皮细胞的分化标记，在所有情况下都检测到与野生型相同的分子量的转录物，但量较小。 3。在比较MI基因的鹌鹑同源物的表达时，这是小鼠微智能突变的致病基因，并表明它调节色素上皮细胞的分化，我们发现在色素上皮细胞中，具有与野生型相同的分子体重，与野生类型相同的野生型，但具有较高的野生型，但具有相同的分子体重。 4。通过Southern印迹分析银突变与MI基因之间的关系表明，在野生型中检测到的大约4.0 kb Hind3片段随着银突变而变为约4.5 kb。 5。从银突变体的色素上皮细胞中分离出MI基因cDNA并将序列与野生型进行比较时，发现MI蛋白基本区域中的组氨酸在银突变体中转化为精氨酸，而C接近C端的77氨基酸则缺陷。从上面可以估计，银突变会导致MI基因中的突变，该基因被认为控制着色素上皮细胞的分化，并且眼睛杯的外层分化为神经素的神经素，类似于内层，而不是色素上皮。