Analysis of gene network Regulating initial sexual differentiation of quail primordial germ cells

鹌鹑原始生殖细胞初始性分化调控基因网络分析

• 批准号: 22K05949
• 负责人: 水島 秀成
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05949/
• 关键词: ウズラ; 生殖細胞系譜; 始原生殖細胞; 性分化

哺乳類の生殖細胞は生殖腺体細胞の性に従い分化する極めて受動的な細胞として一般的に知られている。しかし、アロマターゼ阻害剤処理や性混合キメラウズラ個体を用いた解析から、生殖腺体細胞の性分化と不一致な遺伝的な性を持つ生殖細胞は死滅することがわかってきた。本年度は、生殖細胞系譜が確立される時点で、雌雄生殖細胞には分子レベルで性差が生じていると推定し、その成立に関する分子シグナリングを解明することを目的とした。本年度には、2.5日ウズラ胚の血液を循環している始原生殖細胞（PGC）を回収し、PGCに発現するタンパク質の網羅的な解析を質量分析法を用いて行なった。次いで、質量分析から得られた雌雄PGCに発現する候補タンパク質の抗体を作製し、発現解析を行なった結果、PGCは胚盤葉ステージの初期に出現することがわかった。またCRISPR/Cas9システムを用いて候補タンパク質の発現を抑制したところ、PGCを欠損したウズラ胚が作出されることがわかった。さらにイムノブロット法を用いた解析から、雄に得意なフォームが存在することもわかり、数種のスプライシングや翻訳酵素の存在もまた確認された。その他、胚盤葉PGCの出現には、受精卵外からの液性因子の関与を示唆する結果が得られたため、その受容体の発現の発現解析を実施した結果、受精卵細胞膜にその局在が認められた。受精卵内における液性因子の代謝フォームの存在も明らかとなった。さらにPGCは体細胞系列と独立した細胞増殖周期を示すことも判明した。

哺乳动物的生殖细胞通常被称为高度被动细胞，根据性腺体细胞的性别而分化。但是，使用芳香酶抑制剂治疗和性混合嵌合乌祖拉个体的分析证明，具有遗传性别的生殖细胞与性腺体细胞的性别分化不一致。今年，我们估计，在建立种系时，性别差异发生在种系的分子水平上，目的是阐明与其建立相关的分子信号传导。在今年，在第2.5天收集了鹌鹑胚胎血液的原始生殖细胞（PGC），并使用质谱法对PGCS表达的蛋白质进行了全面分析。接下来，准备了从质谱法获得的男性和雌性PGC中表达的候选蛋白的抗体，进行了表达分析，并发现PGC在胚泡阶段早期出现。此外，当使用CRISPR/CAS9系统抑制候选蛋白的表达时，发现产生了PGC缺陷的鹌鹑胚胎。此外，使用免疫印迹方法的分析表明，雄性具有很强的形式，并且还证实了几种类型的剪接和翻译酶的存在。此外，结果表明，在胚泡的出现中获得了受精卵外部的体液因子的参与，并且由于对受体的表达分析，在受精卵细胞膜中观察到了其定位。也已经揭示了受精卵中的代谢形式的体液因素的存在。还发现PGCs表现出与体细胞谱系无关的细胞增殖周期。

项目成果

Loss of the Y chromosome and the configuration of the X inactivation center in the genus Tokudaia

德大虫属 Y 染色体的缺失和 X 失活中心的构型

• 发表时间: 2022
• 作者: Matiz LUISA;Yuta MOCHIMARU;Kentaro MATSUOKA;Takehiko ITOH;Shusei MIZUSHIMA;Asato KUROIWA
• 通讯作者: Asato KUROIWA

Loss of Y chromosome changes the configuration of X inactivation center in genus Tokudaia

Y染色体丢失改变了Tokudaia属X失活中心的构型

• 发表时间: 2022
• 作者: Luisa MATIZ;Shusei MIZUSHIMA;Takehiko ITOH;Asato KUROIWA
• 通讯作者: Asato KUROIWA

Sry遺伝子をもたない哺乳類種における精巣特異的エンハンサーを介したSox9遺伝子制御の研究

缺乏Sry基因的哺乳动物中睾丸特异性增强子介导的Sox9基因调控研究

• 发表时间: 2022
• 作者: 光川祥一朗;水島秀成;黒岩麻里
• 通讯作者: 黒岩麻里

アマミトゲネズミ精巣特異的エンハンサーを介してSOX9を制御する転写因子の同定

鉴定通过 Amami spiny 小鼠睾丸特异性增强子调节 SOX9 的转录因子

• 发表时间: 2022
• 作者: 光川祥一朗;水島秀成;黒岩麻里
• 通讯作者: 黒岩麻里

E-poster online release; Two isoforms of DDX4 and their differential expression during early embryo development of Japanese quail

电子海报在线发布；

• 发表时间: 2022
• 作者: Shusei MIZUSHIMA;Tomohiro SASANAMI;Tamao ONO;Asato KUROIWA
• 通讯作者: Asato KUROIWA