mi遺伝子の操作による色素上皮細胞の多分化能の検定

mi基因操作检测色素上皮细胞的多能性

• 批准号: 08680803
• 负责人: 餅井 真
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680803/
• 关键词: mi; 色素上皮細胞; 多分化能; 分化転換; mi; 色素上皮細胞; 多分化能; 分化転換

脊椎動物の色素上皮細胞細胞は、一旦分化した後でもレンズ細胞や神経網膜細胞へ分化する能力を維持している。これまでの研究で。bHLHzip型転写因子miが色素上皮再往へと分化しむけるらしいことを明らかにした。このmiの活性を人為的に阻害することにより、色素上皮細胞の潜在的多分化能を引き出すことを試み、以下のような結果を得た。1)miタンパク質のDNA結合領域のアルギニンを欠損した変異、あるいは活性化領域を欠損した変異を作成し、トランスフェクションアッセイにより、転写因子としての活性を検定した結果、いずれもドミナントネガティブ活性を持ち、正常miの活性を阻害することがわかった。2)上記変異遺伝子を持つレトロウイスルを作成し、培養色素上皮細胞へ感染させたが、明らかな分化転換を引き起こすことはできなかった。また、遺伝子発現レベルでも対照実験と差が認められなかった。3)同様に正常miを持つウイルスを感染させたところ、分化転換を誘導する条件下でも、分化転換が観察されなかった。4)miタンパク質のC端領域を欠損する変異を持つウズラsilverの胚から色素上皮細胞を単離・培養し、その分化転換能を検定した。その結果silverホモ個体由来の色素上皮細胞はヘテロ個体由来の細胞より短期間の培養でレンズ細胞へ分化転換することがわかった。5)silverホモ個体由来の色素上皮細胞は、分化転換を誘導することが知られているFGFやEGFなどの因子に対して、より低濃度で反応することがわかった。以上の結果、強力なドミナントネガティブmi変異により、人為的に分化転換を誘導することはできなかったが、miと分化転換との関係をより直接的に明らかにすることができた。さらに解析を深めることにより、色素上皮細胞が持つ多分化能の本質に迫れるものと期待できる。

脊椎动物上皮细胞细胞即使分化后，脊椎动物的上皮细胞也保持分化为晶状体细胞和神经视网膜细胞的能力。从先前的研究。已经揭示了BHLHZIP型转录因子MI再次分化为色素上皮。通过人为地抑制该MI的活性，我们试图在色素上皮细胞中引起潜在的多势，并获得了以下结果。 1）在MI蛋白的DNA结合区域缺乏精氨酸或缺乏激活区域的突变，并使用转染测定法测试了转录因子的活性，并且发现两者都具有显着的负活性并抑制正常MI的活性。 2）在上面的突变基因中逆转并用培养的色素上皮细胞感染，但无法引起明显的转分化。此外，从对照实验中没有观察到基因表达水平的差异。 3）类似地，当感染具有正常MI的病毒时，即使在诱导转分化的条件下，也未观察到转变。 4）分离色素上皮细胞并从鹌鹑银的胚胎中培养，这些突变缺乏MI蛋白的C末端区域，并测试了它们的转分化的能力。结果，发现与来自异性个体的细胞相比，在较短的培养过程中，源自银同性个体的色素上皮细胞会在较短的培养过程中转变为晶状体细胞。 5）发现源自银同源个体的色素上皮细胞对诸如FGF和EGF之类的因素有反应，众所周知，这些因素会在较低浓度下诱导转分化。结果，尽管强大的主要负MI突变不能诱导人为转化的转分化，但MI与转分化之间的关系可以更直接地揭示。通过进一步加深分析，可以预料，我们可以仔细研究色素上皮细胞的多能性质的本质。