sex-linkedアルビノウズラを用いた色素上皮細胞の分化の部域化の研究

性连锁白化鹌鹑色素上皮细胞分化的区域化研究

基本信息

批准号：
05780554
负责人：
餅井真
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780554/
关键词：
sex-linkedアルビノ TRP-1 pp344 コネクシン43 ウズラ tyrosinase MMP115 色素上皮細胞

项目摘要

1.色素化に必要と知られているTRP-1(tyrosinase-related protein 1)遺伝子のcDNAを新たにウズラ色素上皮細胞cDNAライブラリーよりクローン化し、全長のシークエンスを決定した。2.TRP-1およびすでにクローン化したtyrosinaseとmelanosomal matrix protein(MMP115)のcDNAをプローブとして、Northemブロットにより、野性型とsex-linked albinoの色素上皮細胞における遺伝子発現を解析した結果、3種の遺伝子ともその発現にまったく差がなかった。3.色素上皮細胞特異的なプロテアーゼインヒビター様分子をコードするPP344cDNAをプローブとしたin situハイブリダイゼーションをおこなったところ、pp344遺伝子は、網膜色素上皮では強く発現するが、毛様体および虹彩色素上皮では発現しなかった。4.ギャップ結合タンパク質であるコネクシン43cDNAをプローブとしたin situハイブリダイゼーションの結果、毛様体および虹彩の色素上皮で強い発現がみられたが、網膜色素上皮ではほとんど発現が見られず、pp344と相捕的な発現パターンを示した。以上、sex-linled albino変異の原因は同定できなかったが、新たにpp344および、コネクシン43遺伝子が、色素上皮細胞の部域差を反映し、しかも相捕的な発現様式を示すことが明らかになった。そこで、これら遺伝子の発現制御機構および、sex-linked albino変異の分子機構を解析することによって、一層の眼杯外層が網膜、毛様体、虹彩の色素上皮へと部域化する分子メカニズムを明らかにできる道が開けた。

1。trp-1（酪氨酸酶相关蛋白1）基因的cDNA，已知是色素沉着所需的，是从鹌鹑色素上皮细胞cDNA库中新克隆的，并确定了全长序列。 2。我们使用northem blotting使用TRP-1和已经克隆的酪氨酸酶和黑色素体基质蛋白（MMP115）的cDNA分析了野生型和性别连接的白化色素上皮细胞中的基因表达，并发现三个基因表达均无差异。 3。使用PP344 cDNA进行原位杂交，该cDNA编码特定于色素上皮细胞的蛋白酶抑制剂样分子，尽管Pp344基因在视网膜色素上皮中强烈表达，但在睫状体和iris cielment Body和iris copment上皮中并未表达。 4。使用间隙连接蛋白连接蛋白43 cDNA作为探针的原位杂交，在纤毛体和虹膜的色素上皮中观察到了强表达，但是在视网膜色素上皮细胞中几乎没有表达，显示出一种表达模式，与pp344合适。无法鉴定出性别线索突变的原因，但已经发现PP344和连接蛋白43基因反映了色素上皮细胞的区域差异，并且也表现出复杂的表达模式。因此，通过分析这些基因的表达控制机制以及性别链接白化病突变的分子机制，我们开辟了一种阐明眼杯外层成为视网膜上皮上皮的一部分的分子机制的方法。