P-糖タンパク質の関与しない多剤耐性の分子機構の解明とその克服法に開発

阐明不涉及P-糖蛋白的多药耐药性的分子机制并开发克服它的方法

基本信息

批准号：
05857021
负责人：
原口みさ子
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々の分離したP糖タンパク質の発現してない多剤耐性変異細胞株C-A500では、細胞内へのアドリアマイシンの蓄積が親細胞に比べて著しく低下しているが、その完全復帰変異細胞株C-ARでの細胞内蓄積は親KB細胞とほぼ同程まで回復していた。また、C-A500細胞で見られたアドリアマイシンの細胞内蓄積の減少は、ATPを枯渇させるよな条件下では見られなかった。このようなC-A500細胞での抗癌剤の細胞内蓄積の減少は、ATP依存性の抗癌剤排出の亢進によるものであった。更にC-A500細胞では、WGA結合性の糖鎖を有する分子量約190-210kDaの膜糖タンパク質の発現が著しく増加していることが観察された。一方我々の分離した多剤耐性細胞株C-A500でも、最近カナダのグループにより報告されたMRP(Multidrug Resistance-Associated Protein)のmRNAの発現が非常に上昇していると同時に、MRP遺伝子の遺伝子増幅が見られた。MRPタンパク質の発現も、カナダのグループに依頼してイムノブロッティングで確認してもらっている。しかしながらC-A500細胞よりアドリアマイシンに対する耐性度が十分の一以下であるC-A120細胞においても、ビンクリスチンに対する耐性度はすでにC-A500細胞とほぼ同程度で親KB細胞株の250倍以上あり、アドリアマイシンの細胞内蓄積の減少の程度、MRP mRNAの発現レベル、MRP遺伝子の遺伝子増幅の程度及びMRPタンパク質の発現のレベルは、何れもC-A500細胞とほとんど同程度であった。そのためMRP以外の因子もC-A500細胞における多剤耐性に関与しているものと考えられたため、DNA Topoisomerase IIの発現と活性を比較してみたところ、C-A120細胞は親KB細胞に比べて明らかな本酵素の発現と活性の低下がみられ、C-A500細胞では更にC-A120細胞よりも低下していた。しかし復帰変異細胞株C-ARでは、どちらもほぼ親KB細胞のレベルまで回復していた。現在MRPに対する抗体の作製を行っており、少なくとも2種の抗MRPポリクローナル抗体の作製に成功したところである。

在我们分离的不表达p糖蛋白的隔离多种耐药性突变细胞系C-A500中，与亲本细胞相比，阿霉素在细胞中的积累显着降低，但是在完全恢复的突变细胞系C-AR中的细胞内积累c-ar的C-AR中的细胞内积累与亲生kb细胞的水平恢复到相同的水平。此外，在耗尽ATP的条件下未观察到C-A500细胞中Adrimycin的细胞内积累的减少。 C-A500细胞中抗癌剂细胞内积累的减少是由于ATP依赖性抗癌剂的排泄增加所致。此外，观察到，在C-A500细胞中，具有大约190-210 kDa的膜糖蛋白的分子量约为190-210 kDa的表达显着增加。另一方面，如最近加拿大一组报道的那样，我们孤立的多药耐药细胞系C-A500还显示出非常高的mRNN（多药耐药相关蛋白）的mRNA表达，并且观察到MRP基因的基因扩增。加拿大群体还要求MRP蛋白的表达通过免疫印迹确认。 However, even in C-A120 cells, which are less than one-tiss-resistance to adriamycin than C-A500 cells, resistance to vincristine was already about the same level as that of C-A500 cells, and more than 250 times that of parental KB cell lines, the degree of reduction in intracellular accumulation of adriamycin, the level of expression of MRP mRNA, the level of gene amplification of MRP gene, MRP蛋白的表达水平与C-A500细胞的水平相同。因此，认为除MRP以外的因素与C-A500细胞中的多药耐药性有关，并且在比较DNA拓扑异构酶II的表达和活性时，与亲属KB细胞相比，C-A120细胞与该酶的表达和活性明显降低，而C-A500细胞比C-A500细胞进一步降低了C-A120细胞。但是，在恢复的突变细胞系C-AR中，它们俩都恢复到亲本KB细胞的水平。当前，已经产生了针对MRP的抗体，并且已经成功产生了至少两种抗MRP多克隆抗体。