感染初期過程におけるチミジンホスホリラーゼの宿主応答の抑制機構の解析

感染早期胸苷磷酸化酶宿主反应抑制机制分析

基本信息

批准号：
14021103
负责人：
原口みさ子
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021103/
关键词：
チミジンホスホリラーゼリステリア IL-10

项目摘要

TP(チミジンホスホリラーゼ)はチミジンをチミンと2-デオキーd-シリボースー1リン酸に可逆的に分解する酵素でDNA合成のサルベージ経路で働いている。TPは腫瘍に浸潤するマクロファージや末梢リンパ球、脾臓、クッファー細胞などで発現が高いことなどから免疫機構になんらかの機能をもつのではないかと予想し、TPのノックアウトマウスを作製して解析した。1)野生型マウスとノックアウトマウスにリステリア菌を腹腔内投与し、肝臓、脾臓内に残存する菌数を経時的に測定した。48、72時間でノックアウトマウスにおける残存菌数が著明に低くなっていた。このときの血中の種々のサイトカイン濃度を調べたところノックアウトマウスにおいてはIFN gammaの血中濃度の低下がみられなかった。またIL-10濃度は野生型ほど上昇しなかった。2)つぎにリステリア菌をマウス各五匹に感染させ、72時間後に肝臓、脾臓を摘出し各組織の初代培養を行った。ノックアウトマウス由来の肝臓細胞、脾臓細胞の培地中に放出されるIL-10の量はともに野生型由来のものより低下していた。これらのことは感染初期過程においてTPが何らかの機構を介してIL-10産生を誘導し宿主応答を抑制することを示唆する。3)DSSデキストランソデイウムサルフェイトを投与して大腸炎を人工的に作らせ、体重変化とIL-10産生を調べた。ノックアウトマウスの方が顕著な体重減少が認められ、大腸の単位蛋白質量あたりのIL-10産生量も著明に低下していた。4)腫瘍移植に対する抵抗性を比較した。マクロファージの標的細胞として用いられるEL-4リンフォーマ細胞を腹腔内に投与し、細胞数増加を調べたところベノックアウトマウスは明らかにEL-4リンフォーマの細胞増殖が抑えられていた。5)U937細胞、THP-1細胞はTPを内在的に発現する細胞でPMAとLPS刺激によってIL-10を産生する。このときTPの活性阻害剤を添加するとIL-10の産生が部分的に抑制された。現在TPがIl-10産生を誘導するメカニズムについて探索をすすめている。

TP（胸苷磷酸化酶）是一种可逆性地将胸苷降解为胸腺胺和2-脱氧于D-Siribose-1磷酸的酶，并在DNA合成的拯救途径中作用。由于TP在肿瘤浸润的巨噬细胞，周围淋巴细胞，脾和kuffer细胞中高度表达，因此我们预测它可能在免疫系统中具有某种功能，我们创建和分析了TP敲除小鼠。 1）用李斯特菌腹膜内给予野生型小鼠和敲除小鼠，并且随着时间的推移测量了肝脏和脾脏中残留的细菌数量。在48和72小时时，敲除小鼠中的剩余细菌数量明显降低。当此时检查血液中各种细胞因子浓度时，在基因敲除小鼠中没有发现IFNγ的血液浓度降低。此外，IL-10浓度不如野生型增加。 2）然后用李斯特菌细菌感染五只小鼠，并在72小时后去除肝脏和脾脏，并进行每种组织的一级培养。从基因敲除小鼠中释放到肝细胞和脾细胞中的IL-10的量低于野生型细胞。这些表明，在感染的早期阶段，TP通过某些机制诱导IL-10产生并抑制宿主反应。 3）结肠炎是通过施用DSS右旋硫酸盐来人为产生的，并检查了体重变化和IL-10产生。敲除小鼠的体重减轻更明显，大肠中每单位蛋白产生的IL-10量也显着降低。 4）比较了对肿瘤嫁接的耐药性。腹膜内施用EL-4淋巴瘤细胞，被用作巨噬细胞的靶细胞，检查了细胞数量的增加，Benockout小鼠清楚地表明，EL-4淋巴瘤的细胞增殖受到抑制。 5）U937细胞，THP-1细胞是内源性表达TP并通过刺激PMA和LP产生IL-10的细胞。此时，添加TP活性抑制剂会部分抑制IL-10的产生。我们目前正在寻求探索TP诱导IL-10产生的机制。