神経組織に特異的に発現するミオシンの機能とその発現機構の解明

阐明神经组织特异性表达的肌球蛋白的功能和表达机制

• 批准号: 05780450
• 负责人: 高橋 正行
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780450/
• 关键词: ミオシン; Alternative splicing; 神経組織; 組織特異的発現

非筋細胞ミオシン重鎖のアイソフォームであるMHC-Bのアクチン結合部位に神経組織特異的に発現しているB1インサーションの機能及びその発現機構を明らかにすることを目的として今年度は以下の研究を行った。(1)インサーション部分に相当する12merのペプチドを合成し、それに対するポリクローナル抗体を免疫ウサギから調製した。以下はこの抗体を用いた実験結果である。(a)生後、日齢の異なるラットの脳から全タンパク質を抽出し、B1インサーションを含むミオシン重鎖アイソフォーム(MHC-B(B1))の発現量が変化するかどうかをイムノブロット法により調べた。その結果、B1の発現量が特に多い小脳において、B1は生まれた直後には発現しておらず生後2週目位から発現し始め、3週目でほぼAdultレベルに達することが判明した。(b)小脳組織でのB1の発現部位を特定するために、小脳の凍結切片を用いてイムノヒストケミストリーを行った。MHC-Bアイソフォームのすべてのサブタイプを認識する抗体を用いて蛍光抗体染色をしたところ、プルキンエ細胞層と分子層が染色された。B1に対する抗体を用いた場合、プルキンエ細胞層が特に染色された。この結果は、MHC-B(B1)がプルキンエ細胞の細胞体に特に発現していることを示唆する。(c)神経成長因子によって分化誘導されるPC12細胞において、B1インサーションの発現が神経繊維の伸長によって変化するかどうかを調べた。その結果PC12細胞ではB1の発現が全く見られなかった。(2)B1インサーションの近傍をコードするゲノムDNAをPCR法により単離し遺伝子構造を解析したところ、エクソン-イントロンの接合部の配列を読み取ることがれきたので、B1は神経組織に特異的なAlternative splicingによって発現していることが判明した。

以下是今年的以下目的，目的是阐明B1指令的功能以及在MHC-B的肌动蛋白加入位点表达的表达机制，这是一种非肌肉细胞Miocin重链研究。 （1）合成了与指令部分相对应的12-子肽，并从免疫机制备了多克隆抗体。以下是使用该抗体的实验结果。 （a）出生后，所有蛋白质都是从不同大鼠的大脑中提取的，以及含有包含B1指令的MIOSIN重链（MHC-B（B1））的表达，我对IMNOBLOT方法进行了变化。结果，在小脑中，B1表达特别高的小脑，发现B1在出生后没有立即表达，并从出生后的第二周开始出现，并且在第三次达到了成人水平星期。 （b）为了鉴定小脑组织中B1的表达位点，使用小脑冷冻片段进行了IMNO Histos化学。当使用识别MHC-B同工型所有亚型的抗体染色荧光抗体时，染色的细胞层和分子层被染色。当使用与B1的抗体时，特别染色的Pulkin细胞层。该结果表明MHC-B（B1）在Purkin细胞的细胞中特别表达。 （c）在由神经生长因子划分的PC12细胞中，由于神经纤维的生长，B1指令的表达发生了变化。结果，在PC12细胞中未观察到B1的表达。 （2）当通过PCR方法分离分离的编码B1指导附近的基因组DNA时，已经分析了基因结构。