Development of an in vivo model for the evaluation of childhood leukemia using the hematopoietic environment within a teratoma.

利用畸胎瘤内的造血环境开发用于评估儿童白血病的体内模型。

基本信息

批准号：
22K19681
负责人：
高橋正行
金额：
$ 4.08万
依托单位：
Central Research Institute of Electric Power Industry
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

計画初年度となる2022年度は、小児白血病遺伝子発現ヒトiPS細胞を用いたテラトーマの形成と、テラトーマ内に含まれる血液細胞の前白血病状態への移行を検討した。小児白血病遺伝子発現ヒトiPS細胞には研究代表者がこれまでに樹立したETV6-RUNX1発現ヒトiPS細胞を用い、研究分担者が開発した方法を参考に、重度免疫不全マウスに移植することでテラトーマを形成した。テラトーマ内には、ヒトCD45陽性細胞が含まれており、B細胞系や骨髄球系への分化が進んでいること確認した。移植したヒトiPS細胞はDOX存在下でのみ ETV6-RUNX1を発現する特徴を有するため、テラトーマ形成マウスに DOXを飲水投与し、テラトーマ内のヒト血液細胞において ETV6-RUNX1を発現・作用させた。DOXの飲水投与下で飼育しテラトーマを増大させた後、フローサイトメトリーにて詳細に解析した結果、ETV6-RUNX1発現ヒトiPS細胞を移植したマウスのテラトーマには、正常なヒトiPS細胞由来のテラトーマと比較し、Pro-B細胞後期からPre-B細胞に当たるヒトCD10陽性細胞が顕著に高い割合で含まれていることを確認した。CD19陽性細胞に対するCD10陽性細胞の割合比が高かったことから、CD10陽性細胞からCD19陽性細胞への分化段階で障害が生じたと考えられ、ETV6-RUNX1の発現・作用により前白血病様の状態へと移行したことが示唆された。また、乳児期に発症するALLに特徴的に検出され予後不良の指標でもある、 KMT2A-AFF1に着目し、新たに KMT2A-AFF1発現ヒトiPS細胞を樹立した。ETV6-RUNX1発現ヒトiPS細胞と同様、 KMT2A-AFF1の発現にはDOXによる発現誘導システムを採用した（学術論文の投稿準備中）。

在计划的第一年，我们考虑了使用小儿白血病基因的人IPS细胞形成畸胎瘤的，以及向畸胎瘤中包含的血细胞过渡到前白血病状态。小儿白血病基因表达人IPS细胞使用研究代表建立的ETV6-RUNX1表达人IPS细胞，该细胞通过将其移植到严重的免疫小鼠中而被研究共同开发的方法植入。已经证实，人CD45阳性细胞包含在畸胎瘤中，并且它们正在发展为B细胞和骨髓球形。移植的人IPS细胞的特征仅在DOX的存在中表达ETV6-RUNX1，因此DOX被用于形成畸胎瘤的小鼠，并且表达ETV6-RUNX1并在Teratoma中的人体血细胞上作用。在DOX的给药下繁殖，增加了畸胎瘤并在流场地中进行详细分析，将其移植ETV6-RUNX-RUNX-RUNX1表达的小鼠畸胎瘤具有正常的人IPS细胞衍生的畸胎瘤。撞击晚期pro-B细胞中的前B细胞的人CD10阳性细胞包含在显着的高百分比中。由于CD10阳性细胞与CD19阳性细胞的比率很高，因此人们认为，从CD10阳性细胞与CD19阳性细胞的分化阶段存在残疾，以及ETV6-RUNX1与ETV6-RUNX1的表达和作用leukemia的状态已建议它发生了变化。专注于KMT2A-AFF1的特征是对婴儿期发生的所有特征性检测，并且是预后不良的指标，已经建立了一种新的KMT2A-AFF1表达人IPS细胞。像ETV6-RUNX1表达人IPS细胞一样，DOX（准备学术论文）采用了KMT2A-AFF1的表达。