白血病細胞の分化誘導および増殖、分化のメカニズムについての研究

白血病细胞分化诱导、增殖、分化机制研究

• 批准号: 05770809
• 负责人: 日野 雅之
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770809/
• 关键词: フレンド赤白血病細胞; c-kit; activin; Scatchard解析; 分子生物学

フレンド赤白血病細胞株F5-5は生理活性物質であるアクチビンによってヘモグロビン産生細胞に分化するが、その際みられる造血因子受容体発現の変化を検討した。造血幹細胞に発現していると考えられるc-kit遺伝子の発現をみるため、c-kit遺伝子のプライマーを作成し、RT-PCR法によりc-kit遺伝子を増幅し、クローニングした。Sanger法を用いてシークエンスし、マウスc-kit遺伝子であることを確認し、それをプローブとしてNorthern法により解析した。アクチビンを添加したF5-5細胞におけるc-kit mRNAの発現は分化に伴い経時的に減少していることが見いだされた。実際に蛋白レベルでの発現にも反映されているかを検討するためにc-kitのリガンドであるマウス幹細胞因子(SCF)をクロラミンT法を用いてヨード標識し、70000cpm/ngの標品が得られた、binding実験を行ったところ、やはり分化に伴い減少し、アクチビン添加4日目には10%に減少していた。Scatchard解析を行ったところ、分化した細胞でもaffinityには変化なく、細胞表面のレセプター数の減少によるものであることが判った。さらに、分化におけるc-kitの役割を解析するために、c-kit遺伝子のアンチセンスを作成し、c-kit遺伝子の発現を抑制したが、ヘモグロビン合成細胞への分化はみられなかった。以上より、アクチビンは赤白血病細胞をヘモグロビン合成細胞に分化誘導し、その際c-kit遺伝子の発現が低下するが、これ自身が分化へのシグナルにはなっておらず、分化に伴う変化と考えられる。さらにアクチビンによる分化におけるアポトーシスの関与について検討したが、アポトーシスは認められず、他の機序が考えられる。

Friend红白血病细胞系F5-5通过生理活性物质激活素分化为血红蛋白产生细胞，我们研究了该分化过程中造血因子受体表达的变化。为了检查c-kit基因（被认为在造血干细胞中表达）的表达，我们创建了c-kit基因的引物，使用RT-PCR扩增c-kit基因，并克隆它。采用Sanger法测序，确认为小鼠c-kit基因，并以其为探针，采用Northern法进行分析。结果发现，补充有激活素的F5-5细胞中c-kit mRNA的表达随着分化时间的推移而降低。为了检查这是否实际上反映在蛋白质水平的表达中，使用氯胺T法对c-kit的配体小鼠干细胞因子（SCF）进行碘标记，并对70,000 cpm/ng的样品进行了碘标记。当我们进行结合实验时，发现其量随着分化而减少，并在添加activin后的第4天减少至10%。斯卡查德分析表明，即使在分化的细胞中，亲和力也没有改变，这是由于细胞表面受体数量的减少。此外，为了分析c-kit在分化中的作用，我们创建了c-kit基因的反义版本并抑制c-kit基因表达，但没有观察到分化为血红蛋白合成细胞。由上可知，激活素诱导红白血病细胞分化为血红蛋白合成细胞，此时c-kit基因表达降低，但这本身并不作为分化的信号，被认为是与分化相关的变化将会完成。我们进一步研究了细胞凋亡在激活素诱导的分化中的参与，但没有观察到细胞凋亡，这表明存在其他机制。