肝細胞及び骨髄におけるトロンボポエチン産生の生理的調節機構についての研究

肝细胞和骨髓生成血小板生成素的生理调控机制研究

• 批准号: 08770855
• 负责人: 日野 雅之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770855/
• 关键词: トロンボポエチン; 肝細胞癌細胞株; 骨髄ストローマ細胞; トロンボポエチン; 肝細胞癌細胞株; 骨髄ストローマ細胞

1.Thrombopoietin (TPO)が肝臓で産生されていることから、RT-PCRを用いてTPO遺伝子を増幅し、TAクローニングベクターを用いてクローニングした。さらにシークエンスをおこない、TPO遺伝子であることを確認した。分化型肝細胞癌株HepG2を用いてNorthern解析を行い、TPO遺伝子が過剰発現をしていることを見いだし、TPOの産生細胞が肝のparenchymal cellであることを明らかにした。2.HepG2細胞で発現しているTPOの生理活性を確認するため、培養上清をfactor (GM-CSF. IL-3. TPO)依存性白血病細胞株Mo7Eに添加したところ、増殖が刺激された。3.TPOには、種々のisoformが報告されているが、報告者もexon 6に116bpの欠損もみとめたisoformをクローニングした。quantitative RT-PCRを用いて正常な肝臓よHepG2細胞を比較したところ、正常肝臓ではTPO isoformが、intact TPOとほぼ同程度に発現していることがHepG2細胞では、intact TPOが過剰発現していることがわかった。4.Hepatocyte growth factor (HGF)、interleukin-6(IL-6)、interleukin-11(IL-11)、leukemia inhibitory factor (LIF)、platelet derived growth factor (PDGF)、transforming growth factor-β (TGF-β)などのcytokineを用いてTPO mRNAの発現を検討したが、変化は見られず、HepG2細胞が正常の調節機構から逸脱している可能性が考えられた。5.骨髄ストローマ細胞を調節し、RT-PCR法でTPO mRNAの発現を検討したところ、mRNAの発現がみられ、ストローマ細胞でのTPO産生を確認した。

1。由于在肝脏中产生血小板蛋白（TPO），因此使用RT-PCR扩增TPO基因，并使用TA克隆载体克隆。进行了进一步的序列以确认它是TPO基因。使用分化的肝细胞癌HEPG2进行北部分析，并发现TPO基因过表达，表明产生TPO的细胞是肝副细胞。 2。确认在HEPG2细胞中表达的TPO的生理活性，将培养上清液添加到因子（GM-CSF。IL-3。TPO）依赖性白血病细胞系MO7E中，这刺激了增殖。 3. Various isoforms have been reported in TPO, but the reporter also cloned an isoform that had 116bp deficiency in exon 6. When comparing normal liver and HepG2 cells using quantitative RT-PCR, it was found that intact TPO isoform is expressed almost equally as intact TPO in normal liver, and that intact TPO is overexpressed in HepG2 cells. 4. We investigated the expression of TPO mRNA using cytokines such as Hepatocyte growth factor (HGF), interleukin-6 (IL-6), interleukin-11 (IL-11), leukemia inhibitory factor (LIF), platelet derived growth factor (PDGF), and transforming growth factor-β (TGF-β), but no changes were observed, making it possible that HepG2 cells deviate根据其正常的调节机制。 5。当通过RT-PCR方法检查TPO mRNA的表达时，表示mRNA，并在基质细胞中确认TPO产生。