新しい免疫電顕法による線状IgA水疱性皮膚症抗原の微細局在部位の解明

使用新的免疫电子显微镜方法阐明线性 IgA 大疱性皮肤病抗原的精细定位

基本信息

批准号：
05770640
负责人：
石河晃
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770640/
关键词：
線状IgA水疱性皮膚症自己免疫性水疱症免疫電顕法

项目摘要

線状IgA水疱性皮膚症(linear IgA bullous dermatosis)は、難治性の自己免疫性水疱症の一つである。患者血清中のIgAが皮膚基底膜部に結合することが知られているが、抗原の微細局在部位は未知である。今回、新しい免疫電顕法を用いて、抗体の沈着部位の解析を試みた。正常ヒト皮膚を液体プロパン(-190℃)にて急速凍結固定し、超低温下でメタノール置換し、Lowicryl KllMに包埋し、超薄切片を作成、免疫染色を施し観察した。その結果、残念ながら特異的な反応がみられず、手技の途中で抗原性が失活しているものと考えられた。そこで置換剤をアセトンに変更してみたが、結果は同様で、樹脂包埋そのものが問題であることが想定され、免疫電顕の手法の変更を余儀なくされた。一方、免疫ブロット法に関しては、13例の血清を用いて施行したところ、6例が97kD蛋白と、1例が255kD蛋白と反応することがわかった。この抗原の分子量と局在の関係をみるために1MNaCl分離皮膚を用いた蛍光抗体法を施行した結果、97kD蛋白を認識した6例全例を含む10例が表皮側と反応し、255kD蛋白を認識した1例をふくむ3例が真皮側と反応した。今回の結果は以上であるが、微細局在を解明するために現在凍結超薄切片法を施行し、いくつかの症例において金コロイドを用いた免疫染色で、良好な結果を得ている。すなわち表皮側の抗原は基底膜部の透明層に局在し、真皮側の抗原は係留細線維に関連して局在しているらしいというところまで解明された。本研究は現在最終結論を出すべく進行中であり、その結果は今年4月末、米国で開催されるSociety of Dermatology年次総会にて発表する予定である。

线性Iga大胆皮肤病是难治性的自身免疫性牛bullopathies之一。众所周知，患者血清中的IgA与皮肤的基底膜结合，但是抗原的微关闭位点尚不清楚。在本文中，我们尝试使用新的免疫电子显微镜分析抗体沉积部位。正常的人皮肤迅速冷冻并用液态丙烷（-190°C）固定，在超低温度下用甲醇取代，嵌入Lowicryl kllm中，制备超薄切片，进行免疫染色，并观察到。结果，不幸的是，没有观察到没有特定的反应，因此人们认为抗原性在手术过程中被停用。因此，我将替代剂更改为丙酮，但是结果相似，并且假定嵌入树脂本身是一个问题，我被迫更改免疫电子显微镜方法。另一方面，使用13血清进行免疫印迹时，发现六个病例与97KD蛋白反应，一例与255KD蛋白反应。为了查看该抗原的分子量与定位之间的关系，我们使用1M NaCl分离的皮肤进行了荧光抗体方法，其中10例，包括所有识别97KD蛋白的所有6例，与表皮一面反应，而三个病例，其中包括一种识别255KD蛋白质的病例，与dermal side sender sender sender sender sender sender sender。这是当前的结果，但是为了阐明良好的定位，已经采用了冷冻的超薄切片方法，在某些情况下，使用胶体金获得了免疫染色，并获得了良好的结果。换句话说，表皮侧的抗原似乎位于地下膜的透明层中，并且真皮侧的抗原似乎与束缚纤维有关。目前正在进行这项研究以得出最终结论，结果将在今年4月底在美国的皮肤病学会年度会议上介绍。