インフルエンザウイルス複製機構の分子生物学的研究

流感病毒复制机制的分子生物学研究

基本信息

批准号：
05770208
负责人：
榎並正芳
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770208/
关键词：
インフルエンザウイルス複製翻訳 NS1蛋白 M1蛋白

项目摘要

インフルエンザウイルスA型のM1蛋白温度感受性変異株ts-51感染細胞内で、ウイルスゲノムRNAの挙動をin situハイブリダイゼーション法を用い解析した。さらに、蛍光抗体法によりM1蛋白の挙動を解析した。その結果、感染後期に合成されるM1蛋白が核内に存在するRNP複合体(リボ核蛋白複合体)と複合体を形成し、この複合体が細胞質へ移行し、ウイルス粒子へ取り込まれると考えた。ウイルス成熟課程で重要な機能を担い、感染後期に最も良く発現されるM1蛋白の発現制御について解析した。その結果、M1蛋白の発現はNSI蛋白及びM1蛋白により翻訳段階で促進されること、及び、翻訳開始部位上流のRNA配列がこの促進に関与することを明らかにした。次に、インフルエンザウイルスの他の分節からの発現に及ぼすNS1蛋白の影響を調べ、その特異性について解析した。その結果、NS1蛋白はNA、NP蛋白の発現を促進するが、PB1蛋白の発現には、影響しない事を明らかにした。核から細胞質に移行したM1蛋白-RNP複合体がウイルス粒子に取り込まれる機構を知るため、ウイルス膜蛋白の一つNA(ノイラミニダーゼ)のインフルエンザウイルスA型亜型間で良くアミノ酸配列が保存されている細胞質ドメイン、及び膜貫通ドメインに種々の変異を導入しウイルス粒子形成とウイルスの増殖に与える影響を調べ、その機能を解析した。その結果、インフルエンザウイルスA型では、NA蛋白の細胞質ドメイン6残基は共に感染性ウイルス粒子形成にとつて重要であることが明らかとなった。

使用原位杂交方法，在感染了A型流感A型TS-51 M1蛋白温度敏感突变体的细胞中分析了病毒基因组RNA的行为。此外，通过免疫荧光分析了M1蛋白的行为。结果，人们认为在感染的后期合成的M1蛋白与核中存在的RNP复合物（核糖核蛋白复合物）形成了复合物，并且该复合物迁移到细胞质中，并将其迁移到病毒颗粒中。分析了在病毒成熟过程中起重要功能的M1蛋白的表达控制，并在感染的后期表达最好。结果，揭示了NSI和M1蛋白在翻译阶段加速了M1蛋白的表达，并且转化起始位点上游的RNA序列参与了这种促进。接下来，研究了NS1蛋白对来自其他段的流感病毒表达的影响，并分析了其特异性。结果，揭示了NS1蛋白促进Na和Np蛋白的表达，但对PB1蛋白的表达没有影响。要了解已经将已经从细胞核转移到细胞质的M1蛋白RNP复合物纳入病毒颗粒中，将各种突变引入到细胞质结构域中，其中氨基酸序列通常是在流感的A型A型Na（NA（NA）亚型（神经酶）域中的A型亚型和跨膜素蛋白元素的trighan ermane nairane ermar蛋白质素的影响之间的氨基酸序列，并形成和病毒增殖，并分析其功能。结果，可以发现在A型流感病毒中，Na蛋白的两个细胞质结构域6残基对于形成感染性病毒颗粒都很重要。