インフルエンザウイルスNS1蛋白質による翻訳制御の分子機構

流感病毒NS1蛋白翻译控制的分子机制

基本信息

  • 批准号:
    09278211
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.54万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1997
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1997 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

1)インフルエンザウイルスの遺伝子発現調節は、翻訳段階でウイルスNS1蛋白が後期蛋白をコードするmRNAの翻訳開始部位上流に存在する翻訳調節シグナル(TRS)を認識して促進することにより行われる。2)ウイルス感染細胞を蛋白質リン酸化酵素阻害剤H8で処理するとNS1のリン酸化が阻害され、さらに後期蛋白の翻訳促進が特異的に阻害された。3)ヘルパーウイルスを必要としない新しいインフルエンザウイルスの遺伝子操作技術(RNase H法)を開発し、これを用いてNS1蛋白に変異を持つウイルスdl12とN110を作成した。dl12は、N端付近の12残基を欠失するが、温度感受性となり39℃で感染後期にすべてのウイルス蛋白の翻訳が特異的に阻害された。N110はC端側52%を欠失するが、すべての温度で後期蛋白の翻訳だけが特異的に阻害され、ウイルス産生は親株の5-10%に抑制された。4)これら親株と変異株のNS1を、培養細胞内でプラスミドベクターから発現する系を作成し解析を行った。また、GSTタッグを付けたこれらの蛋白を大腸菌で大量に発現し、アフィニティーカラムで精製し解析を行った。5)NS1のC端側52%に主たるリン酸化部位が存在する事が明らかとなった。6)NS1のリン酸化には、細胞内でG-キナーゼの関与が示唆されたが、in vitroのリン酸化反応では、精製A-キナーゼ、C-キナーゼ、G-キナーゼのいずれによっても同程度に強くリン酸化された。in vitroでは、リン酸化によるNS1の翻訳調節とRNP結合活性の調節は確認されなかった。7)WSNのNS1には結合するが変異N110のNS1には結合しない宿主蛋白を確認したので、さらに機能との関りから解析を進めている。
1)流感病毒基因表达调控是通过识别和促进转化信号(TR)来进行的,这些信号(TRS)呈现在翻译阶段中编码晚期蛋白的mRNA的翻译起始位点上游。 2)用蛋白质磷酸酶抑制剂H8治疗病毒感染的细胞可抑制NS1的磷酸化,并特别抑制了晚期蛋白质翻译的促进。 3)我们开发了一种针对不需要助手病毒(RNase H方法)的流感病毒的新基因工程技术,并将其用于创建NS1蛋白中具有突变的病毒DL12和N110。 DL12在N末端删除了12个残基,但温度敏感,并在39°C晚期感染时特异性抑制了所有病毒蛋白的翻译。 N110在C端的52%被删除,但是在所有温度下,只有晚期蛋白质的翻译被特异性抑制,并且将病毒产生抑制至父母菌株的5-10%。 4)准备一个系统以表达培养细胞中质粒载体的这些父和突变菌株并进行了分析。此外,这些具有GST标签的蛋白质在大肠杆菌中大量表达,在亲和力柱上纯化并进行了分析。 5)已经揭示了主要磷酸化位点存在于NS1的C末端的52%。 6)NS1的磷酸化表明G-激酶参与了细胞,但是在体外磷酸化反应中,通过纯化的A型激酶,C-激酶和G-激酶都同样强烈地磷酸化了磷酸化。在体外,没有证实磷酸化诱导的NS1和RNP结合活性的翻译调节。 7)我们已经确认了一种与WSN中NS1结合的宿主蛋白,但在突变体N110中不与NS1结合,因此我们正在根据其功能进一步对其进行分析。

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
榎並正芳: "第2版 微生物学実習提要(東京大学医科学研究所学友会編) 14、2、8 インフルエンザウイルスベクター" 丸善(株)(印刷中), (1998)
江波正义:“第2版微生物学实践概要(东京大学医学科学研究所校友会编)14、2、8流感病毒载体”丸善株式会社(正在出版),(1998年)
  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
榎並正芳: "インフルエンザウイルスNS1,NS2蛋白の構造,機能と発現制御" 日本臨床. 55. 2605-2609 (1997)
Masayoshi Enami:“流感病毒 NS1 和 NS2 蛋白的结构、功能和表达调节”日本临床杂志 55. 2605-2609 (1997)。
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
榎並正芳: "インフルエンザウイルスの分子生物学、-ウイルス工学と細胞生物学の接点" 実験医学. 15. 2356-2361 (1997)
Masayoshi Enami:“流感病毒的分子生物学 - 病毒工程与细胞生物学的交叉点”实验医学。 15. 2356-2361 (1997)
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