RNPトランスフェクション技術を用いたネガティヴストランドRNAウイルスの研究

利用RNP转染技术研究负链RNA病毒

基本信息

批准号：
04271203
负责人：
榎並正芳
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

インフルエンザウイルスは、8本のマイナス鎖RNAゲノムを遺伝子として持つ。ゲノムRNAの転写・複製は核内で行なわれ、感染後期に細胞質へ移行しウイルス粒子に取り込まれる。そこで本ウイルス粒子形成機構の解析を行ない、以下の結果を得た。1.ウイルス粒子形成において重要な機能を担っていると考えられるM1蛋白質の合成は、主に、NS1蛋白質および、おそらくM1蛋白質の自己制御により翻訳段階で促進されると考えられる。2.ウイルスゲノムを含むRNP複合体は、核内で、M1蛋白質と複合体を形成することにより、ウイルス粒子形成の場である細胞質へと移送される。3.ウイルス膜蛋白質の1つNAの細胞質ドメインは、ウイルス粒子形成において必須の役割を担っている。4.NS1蛋白質によるM1蛋白質発現促進に必要な、翻訳開始部位上流のRNAシグナルを同定した。今後は、もう1つのウイルス膜蛋白質であるHAの細胞質ドメイン含めた膜蛋白の細胞質ドメインとRNP-M1複合体の相互作用について解析を行なう予定である。一方、RNPトランスフェクション技術を用いた、インフルエンザウイルスワクチンベクター開発の試みも行なった。モデル実験として、麻疹ウイルス表面抗原エピトープの発現を行なうことにした。その為に、まず、麻疹ウイルス中和エピトープを、モノクローナル抗体を用いて得たエスケープ変異株の解析から同定した。このエピトープをcDNA上で、インフルエンザ蛋白に導入し、現在、この様なキメラウイルスの回収を試みている。

流感病毒携带八种负链RNA基因组作为基因。基因组RNA是细胞核中的转录和复制，在感染后期转移到细胞质中，并被病毒颗粒吸收。因此，分析了该病毒颗粒的形成机理，并获得了以下结果。 1。认为在病毒颗粒形成中是重要功能的M1蛋白的合成被认为在翻译阶段被认为是通过NS1蛋白和M1蛋白的自我调节而加速的。 2。包含病毒基因组的RNP复合物通过与细胞核中的M1蛋白形成复合物，将含有病毒颗粒形成位点的细胞质转移到细胞质中。 3。病毒膜蛋白之一Na的细胞质结构域在病毒颗粒的形成中起着至关重要的作用。 4。鉴定了翻译起始位点上游的RNA信号，这对于通过NS1蛋白促进M1蛋白表达是必不可少的。将来，我们将分析RNP-M1复合物与膜蛋白的细胞质结构域之间的相互作用，包括另一种病毒膜蛋白HA的细胞质结构域。同时，尝试使用RNP转染技术开发流感病毒疫苗载体。作为模型实验，我们决定表达麻疹病毒表面抗原表位。为此，首先是从使用单克隆抗体获得的逃生突变体的分析中鉴定出麻疹病毒中和表位。该表位被引入cDNA上的流感蛋白中，目前正在尝试恢复这种嵌合病毒。