受容体型チロシンキナーゼを介する情報伝達機構

受体酪氨酸激酶介导的信息转导机制

• 批准号: 04152079
• 负责人: 春日 雅人
• 金额: $ 6.4万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04152079/
• 关键词: インスリン受容体; EGF受容体; PI3-キナーゼ; IRS-1; SH-2ドメイン; SHC

インスリン受容体を介する情報伝達系に関しては、PI3-キナーゼの活性化機構について検討を行った。まずPI3-キナーゼの85Kに対するモノクロナル抗体を作製した。この抗体を用いて、CHO-IR細胞について検討した。その結果、インスリン添加により、IRS-1と呼ばれている分子量185,000の蛋白にPI3-キナーゼ活性が結合すると考えられた。その機構としては、IRS-1のチロシン燐酸化部位と想定される燐酸化ペプチドによって、IRS-1と85Kサブユニットの結合が阻害されるが非燐酸化ペプチドによっては阻害されないこと、また85KサブユニットのSH-2ドメインのみを発現するとこの部分がIRS-1と結合することにより、インスリン受容体によってIRS-1がチロシン燐酸化するとその部位をPI3-キナーゼの85KサブユニットのSH-2ドメインが認識して両者が結合すると推定された。EGF受容体を介する情報伝達系に関しては、EGF受容体の各種の変異体を作製した。これらの変異体と細胞内蛋白との結合を検討した。この中で我々はSHCと呼ばれる蛋白がEGF依存性にEGF受容体と結合すること、ある種の変異体ではこの蛋白の結合が認められないことを見い出した。SHCの結合はRas蛋白の活性化、すなわちGTP結合型Ras蛋白の増加と関係していると想定されているが、現在この点について検討中である。またEGF受容体の各種変異体とその作用との関係では、EGF受容体のキナーゼ欠損の変異体でもMAPキナーゼの活性化やチミジンのDNAへの取り込みは高濃度のEGFでは生じることを認めた。従って、EGF受容体には、高濃度ではその内在するキナーゼ活性を介さない情報伝達系も存在すると考えられる。

关于胰岛素受体介导的信号系统，研究了PI3-激酶的激活机理。首先，制备了针对85K PI3-激酶的单克隆抗体。该抗体用于研究Cho-IR细胞。结果，人们认为胰岛素的添加会将PI3-激酶活性与分子量为185,000的蛋白质结合，称为IRS-1。该机制是，假定为IRS-1的酪氨酸磷酸化位点的磷酸塑料肽抑制了IRS-1与85K亚基的结合，但不通过非磷酸化肽的结合。 Furthermore, when only the SH-2 domain of the 85K subunit is expressed, this part binds to IRS-1, and when IRS-1 phosphorylated by the insulin receptor, the SH-2 domain of the 85K subunit of PI3-kinase recognizes that the site is then bound by the SH-2 domain of the 85K subunit of PI3-kinase, and the two are conceived.关于EGF受体介导的信号系统，产生了EGF受体的各种突变体。研究了这些突变体与细胞内蛋白的结合。在这项研究中，我们发现一种称为SHC的蛋白质以EGF依赖性方式与EGF受体结合，并且在某些突变体中未观察到该蛋白的结合。假定SHC结合与RAS蛋白的激活有关，即GTP结合的RAS蛋白的增加，但是目前正在考虑这一点。此外，与各种EGF受体突变体及其作用有关，我们观察到，即使是EGF受体的激酶缺陷突变体也会在高浓度下引起DNA中的MAP激酶激活和胸苷。因此，据信，EGF受体中的信号系统也不会在高浓度下介导其内在激酶活性。

项目成果

Ando,A.: "Enhanced insulin-induced mitogenesis and mitogen-activated protein kinase activities in mutand insulin receptors with substitution of two COOH-terminal tyrosine antophosphory lution sites by phenylalanine" J.Biol.Chem.267. 12788-12796 (1992)

Ando,A.：“用苯丙氨酸取代两个 COOH 末端酪氨酸抗磷酸化位点，增强突变胰岛素受体中胰岛素诱导的有丝分裂和有丝分裂原激活的蛋白激酶活性”J.Biol.Chem.267。

Yonezawa,K.: "Insulin-dependent formation of a complex containing 85-kDa subunit of PI3-kinase and tyrosine-phosphorylated IRS-1." J.Biol.Chem.267. 25958-25966 (1992)

Yonezawa,K.：“胰岛素依赖性形成含有 85 kDa PI3 激酶亚基和酪氨酸磷酸化 IRS-1 的复合物。”