Pー糖蛋白質の関与しない多剤耐性の分子機構の解明と克服方法の開発

阐明不涉及P-糖蛋白的多药耐药性的分子机制并开发克服它的方法

基本信息

批准号：
03152106
负责人：
秋山伸一
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152106/
关键词：
不定型多剤耐性セファランチン PAKー104P 耐性克服

项目摘要

P糖タンパク質の関与しない多剤耐性の機構を解明するために、まず最初にP糖タンパク質の発現していない多剤耐性細胞株の分離を行った。方法は、抗癌剤感受性のヒトKB細胞を親細胞として、P糖タンパク質による多剤耐性を克服するような活性を持つベラパミルまたはセファランチンといった薬剤の存在下に、アドリアマイシンの濃度を段階的に上昇させることにより行った。その結果アドリアマイシンの濃度が100ng/mlの時点でいずれの細胞も衰弱してしまったので、更にフォルボ-ルエステルの一種であるメゼレインを添加したところ、ベラパミル存在下で耐性度の上昇した細胞にはP糖タンパク質の発現がみられた。セファランチン1μg/mlとメゼレイン100nM存在下でアドリアマイシンの濃度を上昇させていった細胞は、現在親KB細胞に比べ約70倍アドリアマイシン耐性となっているが、P糖タンパク質に対するモノクロ-ナル抗体C219を用いたイムノブロッティングではP糖タンパク質は検出できなかった。そこでこのCーA500細胞にはP糖タンパク質の発現はないものと考え、次に他の薬剤に対する交差耐性を調べたところビンクリスチン、VPー16、アクチノマイシンD及びコルヒチンでは明かな耐性度の上昇がみられたが、シスプラチンや5FUではほとんど耐性度は上昇していなかった。また、アドリアマイシン及びビンクリスチンのCーA500細胞内濃度をラジオアイソト-プ標識されたそれぞれの薬剤を用いて調べたところ、いずれも親KB細胞に比べて著しく減少していた。更にこのP糖タンパク質の関与しないアドリアマイシン耐性は、P糖タンパク質の機能を阻害する薬剤として我々の研究室において見いだされたジヒドロピリジン誘導体のPAKー104Pやベラパミルにより、かなりのところまで戻すことが出来ることも見いだしている。今後この細胞の耐性の分子機構を解明していくつもりである。

为了阐明不涉及P-糖蛋白的多药耐药机制，我们首先分离出不表达P-糖蛋白的多药耐药细胞系。该方法以抗癌药物敏感的人KB细胞为母细胞，在维拉帕米或千金藤素等具有克服P-糖蛋白所引起的多药耐药性的药物存在下逐渐增加阿霉素的浓度。结果，当阿霉素浓度为100ng/ml时，所有细胞均减弱，因此当添加佛波酯的一种mezelein时，在维拉帕米存在下抵抗力增加的细胞观察到糖蛋白表达。在 1 μg/ml 千金藤素和 100 nM mezerein 存在下，用浓度不断增加的阿霉素处理的细胞现在对阿霉素的耐药性比亲本 KB 细胞高约 70 倍；免疫印迹无法检测到 P-糖蛋白。因此，我们假设这些CA-A500细胞不表达P-糖蛋白，然后研究了与其他药物的交叉耐药性，发现对长春新碱、VP-16、放线菌素D和秋水仙碱的耐药性明显增加。顺铂和5FU几乎没有增加。此外，当使用放射性同位素标记药物检查细胞内阿霉素和长春新碱的浓度时，与亲代KB细胞相比，它们均显着降低。此外，这种不涉及P-糖蛋白的阿霉素耐药性可以在很大程度上被二氢吡啶衍生物PAK-104P和维拉帕米逆转，我发现它们是我们实验室发现的抑制P-糖蛋白功能的药物。它。未来，我们计划阐明这种细胞耐药性的分子机制。