多剤耐性遺伝子の発現と耐性腫瘍出現の関連性、およびP-糖蛋白質の機能の解析

多药耐药基因表达与耐药肿瘤出现的关系及P-糖蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
63015076
负责人：
秋山伸一
金额：
$ 3.14万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

多くの多剤耐性癌細胞では細胞膜にP-糖蛋白質が増加している。遺伝子の解析などからこの蛋白質は抗がん剤を能動物に細胞外へ排出するポンプの機能を有している可能性が大きいと考えられている。我々は多剤耐性を克服する合成イソプレノイド、SDB-エチレンジアミンは抗がん剤をエネルギー依存性に細胞外へ放出するP-糖蛋白質と直接結合し、その結合部位は抗がん剤の結合する部位と同じであることを示した。これらの実験結果より多剤耐性克服薬剤はP-糖蛋白質の抗がん剤結合部位と結合し、P-糖蛋白質と抗がん剤の結合を妨げ、同蛋白質の機能を阻害していることが示唆された。また耐性克服薬剤や抗がん剤の間でP-糖蛋白質への結合力に差異のあることが判明した。一方、ジヒドロピリジン誘導体、^3H-アジドピンはP-糖蛋白質と特異的に結合し、その結合力はSDB-エチレンジアミンより強い。^3H-アジドピンとP-糖蛋白質の結合を強く阻害するジヒドロピリジン誘導体ほど耐性克服活性も強い傾向が認められ、これを利用した簡便な耐性克服薬剤のスクリーニング法を開発した。我々はさらに色素ローダミンがP-糖蛋白質により細胞外へ放出されることを見出した。この現象を利用して多剤耐性細胞から同色素が放出されるのを阻害する薬剤をスクリーニングすることにより耐性克服活性を有する薬剤を短時間に容易に見出すことに成功している。現在約400種類のジヒドロピリジン誘導体について、フォトアフィニティーラベル法、ローダミン法、MTT法などを用いて耐性克服活性を有する誘導体を検索している。このうち数種類の誘導体についてベラパミールやセファランチンより耐性克服活性が強く、しかもカルシウムチャンネル拮抗作用が低いことが判明し、動物実験を行っている。

许多多重耐药癌细胞的细胞膜中 P-糖蛋白增加。根据基因分析，人们认为这种蛋白质可能具有将抗癌药物排出细胞的泵的功能。我们发现SDB-乙二胺是一种克服多药耐药性的合成类异戊二烯，它直接与P-糖蛋白结合，P-糖蛋白以能量依赖的方式将抗癌药物释放出细胞，其结合位点就是抗癌药物的结合位点。结果表明它与这些实验结果表明，克服多药耐药性的药物与P-糖蛋白的抗癌药物结合位点结合，阻止P-糖蛋白与抗癌药物的结合，并抑制该蛋白质的功能。研究还发现，抵抗药物和抗癌药物与P-糖蛋白的结合强度存在差异。另一方面，二氢吡啶衍生物^3H-叠氮平与P-糖蛋白特异性结合，其结合强度比SDB-乙二胺更强。据观察，强烈抑制^3H-叠氮平与P-糖蛋白之间结合的二氢吡啶衍生物往往具有更强的抗药性克服活性，我们利用其开发了一种简单的抗药性药物筛选方法。我们进一步发现染料罗丹明是通过P-糖蛋白从细胞中释放出来的。通过利用这种现象来筛选抑制多重耐药细胞释放相同染料的药物，我们成功地在短时间内轻松地找到了具有克服耐药性活性的药物。目前，我们正在利用光亲和标记法、罗丹明法、MTT法等在约400种二氢吡啶衍生物中寻找具有抗药性克服活性的衍生物。已发现其中几种衍生物比维拉帕米和千金藤碱具有更强的克服耐药性的活性，并且具有较低的钙通道拮抗作用，目前正在动物身上进行测试。