肝癌におけるピルビン酸キナ-ゼアイソザイムの遺伝子発現を制御する因子

肝癌丙酮酸激酶同工酶基因表达的调控因素

基本信息

批准号：
02152066
负责人：
田中武彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

肝細胞の癌化に伴うピルビン酸キナ-ゼアイソザイムの変動の程度は肝癌の悪性度と密接に関係している。本研究は肝癌におけるこのような遺伝子発現を制御する因子を固定することを目的とし、今年度は以下の点を明らかにした。L型アインザイムの肝細胞での転写に必要な3ケ所のシス作用領域(LーI、LーII、LーIII)を固定し、それらの配列や特性を明らかにした。すなわち、これらの領域の活性は単独では非常に弱いか、ほとんど認められない。しかし、これらが共に同じ方向に位置した場合には、プロモ-タ-の種類、位置、方向に関係なくプロモ-タ-活性を相乗的に促進したので、1つのエンハンサ-ユニットと考えられた。このユニットを含む領域はトランスジェニックマウスの系でも内因性のL型と同じ組織特異的発現を惹起した。LーIには転写因子LFーB1が、他の領域には未知の核蛋白質が結合することが判明した。このユニットの活性は分化型肝癌では低下し、未分化型肝癌では検出できなかったので、上記の転写因子のどれかが低下、消失しているものと考えられた。しかし、LFーB1の発現は同じ未分化型肝癌でもdRLhー84では検出できなかったが、AH130では正常と同程度に認められたので、その機序は必ずしも同じではないかも知れない。一方、M_2型は転写の制御領域はー500bpまでに存在することが示唆された。この領域の活性は正常細胞では検出されなかったが、M_2型を発現していない分化型肝癌では認められた。それゆえ、この肝癌では転写因子は存在するが、クロマチン構造のために作用できないものと考えられる。事実、未分化型肝癌でー200bp付近に認められるDNaseI感受性部位は分化型肝癌や正常肝細胞では認められなかった。

与肝细胞癌相关的丙酮酸喹啉酶同工酶的波动程度与肝癌的恶性肿瘤密切相关。这项研究的目的是修复调节肝癌中这种基因表达的因素，今年我们已经揭示了以下几点：固定了L型Einzymes所需的三个顺式作用区域（LI，L-II和L-III），固定了肝细胞中L型Einzymes。也就是说，仅这些区域的活性要么很弱，要么几乎没有观察到。但是，当两者都位于同一方向时，无论启动子的类型，位置或方向如何，它们都协同促进启动子活动，被认为是一个增强子单元。包含该单元的区域引起了与转基因小鼠系统中内源性L类型相同的组织特异性表达。发现转录因子LF-B1与LI和未知核蛋白与其他区域结合。该单元的活性在分化的肝癌中降低，在未分化的肝癌中无法检测到，并且人们认为上述任何转录因子都降低或消失了。然而，即使在同一未分化的肝癌中，LF-B1表达也未通过DRLH-84检测到，而是观察到与AH130的正常情况相似，因此该机制不一定是相同的。另一方面，建议转录控制区域以-500 bp的形式存在。在正常细胞中未检测到该区域的活性，而是在未表达M_2的分化肝癌中观察到的。因此，尽管该肝癌中存在转录因子，但据信它们由于染色质结构而无法起作用。实际上，在分化的肝癌或正常肝细胞中发现未发现未分化的肝癌的DNase I敏感位点。