グルタチオン・トランスフェラ-ゼP遺伝子の肝癌特異的発現機構

肝癌特异性谷胱甘肽转移酶P基因表达机制

基本信息

批准号：
03152024
负责人：
村松正實
金额：
$ 2.82万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152024/
关键词：
GSTーP GPE cーjun エンハンサ-サイレンサ-SFーB CAT トランスジェニックラット

项目摘要

今年度はGSTーP遺伝子上流にあるエンハンサ-GPEIに結合する蛋白質の同定を進めた。GPEIーCATの活性がcーjunを欠失するF9細胞でも十分存在することから、これがAP1(cーjun/cーfos)によって活性化されるのではないことは推定されていたが、更にアンチセンスcーjunの発現によっても影響を受けないことからこれが確かめられた。F9細胞抽出液によるゲルシフトで2つのGPEI特異的バンドが検出されこれはTREでは競合されなかった。現在、これら蛋白質のクロ-ニングを試みている。次のGSTーPのサイレンサ-に結合する蛋白質因子を2つ同定し、SFーA,SFーBと名づけたが、そのうち上流数ヶ所に結合するSFーAはほぼ単一に迄精製し、現在クロ-ニング中である。1ヶ所にのみ結合するSFーBはその配列を用いたSouthwestern法によりクロ-ン化に成功したが、その配列は驚くべきことに既知のエンハンサ-因子LAP(又はNFーIL6)と同一であった。この蛋白を大腸菌で発現させ精製して調べるとサイレンサ-へも、CRP遺伝子上流のLAP結合部位へも同様に結合した。従って、LAP/SFーBは状況や結合配列によって正にも負にも働き得る因子であることが判る。最後に、GSTーP遺伝子と上流をCAT構造遺伝子に繋ぎ、受精卵に注入してトランスジェニックラットを作り、これらについて化学発癌実験を行なった所、発生した肝癌細胞にはすべてCATが強く発現していた。これは化学発癌過程におけるGSTーP遺伝子の活性化がここに用いた上流(-2.9Kb)のみで十分であり、ゲノム上の位置に無関係であることを示しており、肝癌を起こす遺伝子との関連はcisではなくtransであることを初めて証明したものである。

今年，我们继续鉴定了一种与位于 GST-P 基因上游的增强子 GPEI 结合的蛋白质。由于GPEI-CAT活性即使在缺乏c-jun的F9细胞中也充分存在，因此推测其不被AP1(c-jun/c-fos)激活，这通过其不受AP1影响的事实得到证实。反义c-jun的表达。在 F9 细胞提取物的凝胶迁移中检测到两条 GPEI 特异性条带，这些条带未被 TRE 竞争。我们目前正在尝试克隆这些蛋白质。我们鉴定了两种与 GST-P 沉默子结合的蛋白质因子，并将它们命名为 SF-A 和 SF-B，其中与多个上游位点结合的 SF-A 已被纯化为几乎单一蛋白质，目前正在克隆中。进步。 SF-B 仅结合一个位点，通过 Southwestern 方法使用其序列成功克隆，但令人惊讶的是该序列与已知的增强子因子 LAP（或 NF-IL6）相同。当该蛋白在大肠杆菌中表达、纯化和检查时，它与沉默子和 CRP 基因上游的 LAP 结合位点类似地结合。因此，可以看出LAP/SF-B是一个可以根据情况和结合序列发挥积极作用或消极作用的因素。最后，我们将GST-P基因上游连接到CAT结构基因上，并将其注射到受精卵中，创造出转基因大鼠。当我们对这些大鼠进行化学致癌实验时，我们发现CAT在所有肝癌细胞中都有强表达。开发了。这表明在化学致癌过程中GST-P基因的激活仅在此处使用的上游（-2.9 Kb）是足够的，并且与其在基因组上的位置无关，并且与引起肝癌的基因无关这是第一个证明该关联是反式而非顺式的。