CEA遺伝子ファミリ-の機能ならびに発現調節機構の解析

CEA基因家族的功能及表达调控机制分析

基本信息

批准号：
02151056
负责人：
谷内昭
金额：
$ 5.12万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02151056/
关键词：
CEA NCA BGPI CEAファミリ-遺伝子トランスフェクト-マ

项目摘要

CEAファミリ-の機能ならびに発現調節機構を解明することを目的に谷内班員は大腸および肝組織におけるCEA,NCA,BGPI mRNAの発現を検討した。その結果,CEAとNCAが互いに関連した発現を示すのに対し,BGPIは異なる発現態度を示し,とくに肝においてはBGPIのみが発現することを見い出した。またカナダのStanners博士との共同研究で,BGPIトランスフェクト-マを用いて,BGPIが細胞接着因子として機能する上で細胞質内ドメインの存在が必須であることを示した。松岡班員は,白血球の産生するNCA分子種について検討し,cDNAライブラリ-から,これまで知られていないNCAサブファミリ-とも言える4つのクロ-ンを単離した。クロ-ンW272はNCAと同様の構造であったが,他の3クロ-ンはいずれも免疫グロブリン様ドメインを欠いていた。トランスフェクト-マを作製して接着活性を調べたところ,W272はNCAとのみ強い接着活性を示しCEAやW272同志では活性を認めず複雑な分子間の関係が示唆された。中里班員はSV40初期プロモ-タ-制御下のヒトCEAトランスジェニックマウスを作製した。脳,胸腺,肺,脾,肝,腎,結腸において3.0KbのCEA mRNAが検出された。またウェスタンブロット法にて蛋白レベルでの発現も確認された。免疫染色では結腸上皮,気管支上皮の管腔側が染色され,ヒトにおけると同様,細胞極性と関係することが示唆された。日野田班員は,BGPIのC末端側のalternative splicingによって少くとも4つのisoformが存在しうることをRTーPCR法で示した。胆汁のウェスタンブロット法では85と110Kdの2つのBGPI分子種の存在が示唆された。これらの対応関係を明らかにする目的で,BGPIのC末端側を大腸菌ベクタ-に組み込み,組み換え蛋白を作製した。これに対するモノクロ-ナル抗体を作製中である。

为了阐明CEA家族的功能和表达调控机制，谷内先生研究了大肠和肝脏组织中CEA、NCA和BGPI mRNA的表达。结果，我们发现CEA和NCA以彼此相关的方式表达，而BGPI以不同的方式表达，特别是，仅BGPI在肝脏中表达。此外，在与加拿大斯坦纳斯博士的联合研究中，我们使用 BGPI 转染器表明，胞质内结构域的存在对于 BGPI 作为细胞粘附因子发挥作用至关重要。团队成员松冈研究了白细胞产生的 NCA 分子种类，并从 cDNA 文库中分离出四个克隆，这些克隆可以称为迄今为止未知的 NCA 亚家族。克隆W272具有与NCA相似的结构，但其他三个克隆均缺乏免疫球蛋白样结构域。当制备转染子并研究粘附活性时，W272仅与NCA表现出强粘附活性，但与CEA或W272没有观察到活性，表明分子之间存在复杂的关系。团队成员 Nakazato 在 SV40 早期启动子的控制下产生了人类 CEA 转基因小鼠。在脑、胸腺、肺、脾、肝、肾和结肠中检测到 3.0 Kb 的 CEA mRNA。蛋白质水平的表达也通过蛋白质印迹法得到证实。免疫染色显示结肠上皮和支气管上皮的管腔侧被染色，表明这与细胞极性有关，就像在人类中一样。团队成员 Hinoda 通过 RT-PCR 证明，由于 BGPI C 末端的选择性剪接，至少可以存在四种异构体。胆汁的蛋白质印迹表明存在两种 BGPI 分子种类：85 和 110 Kd。为了澄清这些对应关系，我们将 BGPI 的 C 端插入大肠杆菌载体中以创建重组蛋白。目前正在生产针对这种情况的单克隆抗体。