興奮性アミノ酸レセプタ-とイオンチャンネルの共役機構に関する神経化学的研究

兴奋性氨基酸受体与离子通道耦合机制的神经化学研究

• 批准号: 01571229
• 负责人: 米田 幸雄
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Setsunan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01571229/
• 关键词: 興奮性アミノ酸レセプタ-; L-グルタミン酸; N-メチル-D-アスパラギン酸; イオンチャンネル; グリシン; 非競合的アンダゴニスト; トランスメンブランコントロ-ル; 神経化学

興奮性アミノ酸レセプタ-サブタイプの中で、N-メチル-D-アスパラギン酸(NMDA)感受性レセプタ-は、活性化に伴い連関するイオンチャンネルを開放して、Na^+やCa^<2+>の細胞内流入を誘発する。この細胞内流入を非競合的に遮断するMK-801の放射性標識化合物を用いて、NMDAチャンネルの活性を測定した。ラット脳から調製したシナプス膜標品を界面活性化剤のTriton X-100で前処理すると、〔^3H〕MK-801結合は著明に低下した。L-グルタミン酸(Glu)の添加は、10nM以上で濃度依存的に結合を増強させた。NMDAをはじめL-アスパラギン酸などNMDAアゴニスト作用を持つ興奮性アミノ酸は、いずれもGluと同様の結合増強作用を示したが、これらの増強作用はD-PA5やCPPなどの競合的NMDAアンタゴニストにより完全に拮抗された。また、他のサブタイプのアゴニストは本結合に著変を与えなかった。Glu存在下にグリシン(Gly)を添加すると結合はさらに増強されたが、このGlyの増強作用は古典的Glyアンダゴニストのストリキニ-ネでは阻止されなかった。電気生理学的研究成績と一致して、D-アラニンやD-セリンなどかGlYと同様の結合増強作用を発揮したが、それぞれのL体の増強作用は軽微であった。このGlyによる増強は、競合的NMDAアンタゴニストにより完全に阻止された。また、前処理膜標品への結合の薬理学的性質は非処理膜標品の場合とほぼ同一であった。以上の結果から、本結合は活性化状態のNMDAチャンネルの生化学的指標として有用であること、およびGlyの結合増強作用はNMDA認識部位の状態に存在して出現することが示唆される。

在激活后，在兴奋性氨基酸受体 - 亚型中，N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）敏感受体释放了连接的离子通道，诱导Na^+和Ca^<2+>的细胞内涌入。使用MK-801的放射性标记化合物测量NMDA通道的活性，该化合物非竞争地阻断了这种细胞内涌入。用表面活性剂Triton X-100 [^3H] MK-801结合从大鼠大脑制备的突触膜制剂的预处理显着降低。 l-谷氨酸（GLU）的添加以10 nm或更高的浓度依赖性方式增加了结合。所有具有NMDA激动剂作用的兴奋性氨基酸，例如NMDA和L-天冬氨酸，都表现出与GLU相似的结合增强作用，但是这些增强作用被竞争性NMDA拮抗剂（如D-PA5和CPP）完全拮抗。此外，激动剂的其他亚型并未显着改变这种结合。在存在GLU的情况下，甘氨酸（Gly）的添加进一步增强了结合，但是经典的Gly和促动剂Strichinine并没有阻止Gly的这种增强作用。与电生理研究结果一致，它发挥了与Gly相似的结合增强作用，例如D-丙氨酸和D-丝氨酸，但是每个L体的增强作用次要。 Gly的这种增强被竞争性的NMDA拮抗剂完全阻止了。此外，与预处理的膜制剂结合的药理特性几乎与未处理的膜制剂相同。以上结果表明，这种结合可作为活化NMDA通道的生化指标，并且Gly的结合增强作用出现在NMDA识别位点的状态中。

项目成果

Y.Yonada: "Radioligand labeling of N-methyl-D-aspartic acid(NMDA)receptors by〔^3〕(±)-3-(2-carboxypiperazin-4-yl)propy1-1-phosphonic acid in brain synaptic membranes treated with Triton X-100." Biochemical Pharmacology. 39. 225-228 (1990)

Y.Yonada：“脑突触膜中 N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体的放射性配体标记〔^3〕(±)-3-(2-羧基哌嗪-4-基)丙基1-1-膦酸用 Triton X-100 处理。” 生化药理学。 39. 225-228 (1990)

Y.Yoneda: "Leabling of NADA receptor channels by〔^3〕MK-801 in brain synaptic membranes treated with Triton X-100." Brain Research. 499. 305-314 (1989)

Y.Yoneda：“用 Triton X-100 处理的脑突触膜中的 MK-801 释放 NADA 受体通道。” 499. 305-314 (1989)。

Y.Yoneda: "Characterization of quisqualate-sensitive〔^3H〕glutamate binding activity solubilized from rat adrenal." Neruochemistry International. 15. 137-143 (1989)

Y.Yoneda：“大鼠肾上腺溶解的君子草酸敏感[^3H]谷氨酸结合活性的表征。国际神经化学”15. 137-143 (1989)。

Y.Yoneda: "Abolition of the NMDA-mediated responses by a specific glycine antagonist,6,7-dichloroquinoxaline-2,3-dione(DCOX)." Biochemical and Biophysical Research Communications. 164. 841-849 (1989)

Y.Yoneda：“通过特定的甘氨酸拮抗剂 6,7-二氯喹喔啉-2,3-二酮 (DCOX) 消除 NMDA 介导的反应。”

Y.Yoneda: "Interaction of strychnine-insensitive glycine binding with MK-801 binding in brain synaptic membranes." Journal of Neurochemistry. 55. (1990)

Y.Yoneda：“马钱子碱不敏感的甘氨酸与脑突触膜中 MK-801 结合的相互作用。”