NMDAレセプタ-を介するトランスメンブランコントロ-ル機序の解明

阐明 NMDA 受体介导的跨膜控制机制

基本信息

批准号：
03671074
负责人：
米田幸雄
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

NーメチルーDーアスパラギン酸(NMDA)を介するトランスメンブランコントロ-ル機序解明の目的で、各種放射性リガンドを用いた結合実験法による生化学的解析を行い、以下の研究成績を得た。ラット脳より調製したシナプス膜標品に低濃度Triton Xー100前処理を含む洗浄操作を加えると、アロステリックアンタゴニストである[ ^3H](+)ー5ーmethy1ー10,11ーdihydroー5Hーdibenzo[a,d]cycloheptenー5,10ーimine(MKー801)の結合はほぼ完全に消失した。この時反応液にアゴニストであるLーグルタミン酸(Glu)を添加すると、同結合は10nM以上のGluの濃度範囲では濃度依存的に増加した。グリシン(Gly)の添加は結合をさらに濃度依存的に増強したが、両アミノ酸添加条件下に内在性ポリアミンの一つであるスペルミジン(SPD)を添加すると結合は未洗浄膜標品の場合と同一レベルにまで回復した。しかしながら、GlyやSPDの単独添加条件下では結合は殆ど著明な変化を示さなかった。アゴニスト類を添加しない場合には結合は非常にゆっくりと経時的に進行し、反応開始後24時間を経過しても結合は平衡状態に到達しなかった。Gluの添加により結合の初速度が著明に促進されて、反応開始後約5時間後には結合は平衡状態レベルに到達した。Glyの添加はさらに結合初速度を促進して、Glu/Gly共存下では反応開始後2時間以内に結合は平衡状態に到達したが、その平衡状態レベルはGlu単独添加条件下レベルとの間に有意な変動を示さなかった。これに対して、SPDはGlu/Gly共存下の結合初速度には著変を与えずに平衡状態レベルを約2倍に上昇させた。これらの結合増強作用はいずれの添加条件下においても、NMDAアンタゴニストやGlyアンタゴニストの添加により有意に拮抗された。以上のように、[ ^3H]MKー801結合がNMDAチャネル開放度の生化学的指標となること、およびGluやGlyの場合とSPDの場合とではそのNMDAチャネル開放促進作用メカニズム間に明白な相違点が観察されることが明かとなった。

为了阐明通过N-甲基D-瓦氏抗酸（NMDA）的透明空白对照机理，使用各种放射性配体通过身体分析进行以下研究记录。如果您在从大鼠大脑制备的突触膜上添加清洁操作，包括低浓度Triton X -100妊娠，它是呈alosteric拮抗剂[ ^3H]（+）-Methy1 -11-10,11 -dihydro 5H dibenzo的键[a，， d]环甲环霉菌-5,10 -Imine（MK -801）几乎完全消失了。此时，当将激动剂L-葡萄酸（GLU）添加到反应溶液中时，组合的浓度增加，具体取决于10 nm或更多的GLU浓度范围。甘氨酸的添加（GLY）进一步增加了结合，但是如果将两个氨基酸的内部多胺之一的精子（SPD）恢复到该水平。但是，在Gly和SPD的单人添加条件下，键几乎没有明显的变化。如果激动剂没有添加，则键将非常缓慢地进行，并且在反应开始后24小时后，键没有达到平衡。 GLU的添加促进了键的初始速度，在反应开始后约5小时，键达到平衡水平。 Gly的添加促进了键的初始速度，在GLU/GLLY共存下，键在反应开始后的2小时内达到了平衡，但是在GLU独立添加下的水平之间，平衡水平没有显示重大变化。作为响应，SPD将平衡水平提高了大约两倍，而无需给出GLU/GLY共存下的初始速度的书。在任何其他条件下，通过添加NMDA和Gly拮抗剂来显着拮抗这些结合增强。如上所述，[ ^3H] MK -801键成为NMDA通道开放度的生化指标，在Gly或Gly的情况下，SPD的情况很明显。观察到差异。