耳下腺腺房細胞のサブスタンスP受容体の脱感作機構

腮腺腺泡细胞P物质受体的脱敏机制

基本信息

批准号：
01571031
负责人：
杉谷博士
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01571031/
关键词：
耳下腺サブスタンスP受容体脱感作リン酸化

项目摘要

ラット耳下腺腺房細胞をトリプシンとコラゲナ-ゼを用いて作成し、サブスタンスP受容体の同種脱感作機構において、サブスタンスP受容体蛋白質のリン酸化が関与するか否かについて検討し、次の結果を得た。1.サブスタンスPで前処理した細胞から膜分画をとり、〔^<125>I〕サブスタンスPの結合数およびアフィニティ-を測定した結果、サブスタンスPで前処理しない細胞からの膜分画に比べ、結合数のみが有意に減少していた。2.〔^<125>I〕サブスタンスPを腺房細胞の膜分画にジサクシニミジルサブレイト(DSS)を使用しクロスリンクさせ、SDS-PAGE電気泳動法によりサブスタンスP結合蛋白質を検討した結果、その分子量は約60,000であることを確認した。3.^<32>Pを取り込ませた腺房細胞を、サブスタンスP刺激し、その後膜分画を分離し、SDS-PAGE電気泳動法でリン酸化を検討したところ、サブスタンスP刺激によって、分子量60,000と33,000の蛋白質がリン酸化された。以上のことは、サブスタンス刺激によりその受容体がダウンレギュレ-トされることがサブスタンスP作用の脱感作の原因であり、さらにその過程に分子量約60,000のサブスタンス受容体がリン酸化される可能性を示している。さらに、このサブスタンスP受容体蛋白質は1.0%のCHAPSで腺房細胞の膜画分より可溶化することができた。現在、この分画でのサブスタンスP受容体蛋白質の性質を検討中であり、この蛋白質への〔^<125>I〕サブスタンスPのクロスリンクを試みており、また、この蛋白質のリン酸化を得ることにより、より直接的なリン酸化の関与の証明になるものと思われる。

使用胰蛋白酶和Collagena-Ze在腺体细胞下产生的大鼠，检查物质P受体蛋白是否参与了P受体的相同敏感性。 1。与未在未经预处理的细胞的膜分裂相比测量[^<125> i]物质P结合和亲和力，从预处理细胞中绘制的膜部分，以及测量[^<125> i]物质P结合和亲和力物质P。仅键的数量显着减少。 2。[^<125> i]物质P使用Disakusinimidille subtate（DSS）作为腺细胞的膜进行了交联，并通过SDS-PAGE电泳检查了物质P组合蛋白。分子量约为60,000。 3。p刺激掺入P，分离P的腺细胞，并使用SDS-PAGE电泳方法检查磷酸化，由于物质P刺激，分子量为60,000，而33,000个蛋白质则被磷酸化。以上是通过物质刺激将受体下降的原因是物质p作用的脱离的原因，并且可能显示出分子量约60,000的物质受体。此外，该物质P受体蛋白是来自腺细胞膜绘画的CHAPS溶液的1.0％。目前，我们正在考虑该分裂中P受体蛋白的性质，并且我们正在尝试交叉链接[^<125> i]物质P到该蛋白质，并因此获得了该蛋白的磷酸化。成为更直接参与磷酸化的证明。