シンタキシンの唾液腺細胞間接着装置調節分子としての役割

突触融合蛋白作为唾液腺细胞间粘附装置调节分子的作用

基本信息

批准号：
13877315
负责人：
杉谷博士
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

開口放出は分泌顆粒膜に存在するタンパク質と細胞膜に存在するタンパク質の融合によって引き起こされる現象である。神経終末においては,膜に存在するt-SNAREとして,SNAP-25およびシンタキシン1Aが知られている。まず,抗SNAP-25抗体を用いてラット舌下腺腺房細胞における存在を検討したところ,このSNAP-25と思われる分子の検出はできなかった。ところが,抗シンタキシン1A抗体を用いて,ラット舌下腺腺房細胞におけるシンタキシン1Aの存在を検討したところ,ラット舌下腺腺房細胞の膜画分に明らかな抗シンタキシン1A抗体に反応する分子が認められた。さらに,唾液腺でのシンタキシン1Aの存在を確認する目的で,ラット舌下腺,顎下腺,耳下腺から総mRNAを抽出し,ノーザンブロティングを行った。その結果,ラット舌下腺には有意なシンタキシン1Aの発現が認められた。次に蛍光抗体法を用いて,シンタキシン1Aの局在を検討したところ,舌下腺腺房細胞の細胞間接着部位近傍に存在することが認められた。抗シンタキシン1A抗体を用いて免疫沈降法にて結合タンパク質を検索したところ,タイトジャンクションに存在するクラウディン,オクルディンが検出されたが,ZO-1は検出されなかった。さらに,この局在は,クロライドイオン輸送に関与すると考えられているチャンネルの1つであるCLC-2の局在とほぼ一致していた。このことから,シンタキシン1Aはラット舌下腺において開口放出関連タンパク質としてよりもクロライドイオンチャンネルの調節因子として機能している可能性が考えられた。

开放释放是由分泌颗粒膜和细胞膜中蛋白质中存在的蛋白质融合引起的一种现象。在神经的末尾，Snap-25和sintaxin 1a在膜上被称为T-SNARE。首先，当使用抗SNAP-25抗体存在大鼠在大鼠腺细胞中的存在时，无法检测到该SNAP-25分子。然而，当使用抗-sinchin 1a抗体检查大鼠腺细胞中sintaxin 1a的存在时，有一个分子对抗sendaxin 1a抗体有反应，这在大鼠膜的膜中显而易见 - 无形的腺细胞。此外，为了确认在唾液腺中存在Sintaxin 1a的目的，从大鼠东正教腺中提取了总mRNA，并进行了底锁和北部制作。结果，在大鼠中观察到明显的sintakicin 1a的显着表达。接下来，使用荧光抗体法，发现辛加蛋白1a 1a的定位位于舌腺结实细胞细胞的细胞粘附位点附近。检测到抗阳性抗体1a 1a抗体通过免疫搜索结合蛋白，并且检测到存在于紧密连接处的Claudin，Okurdin，但未检测到ZO-1。此外，定位几乎与局部CLC-2一致，后者是被认为参与氯离子运输的通道之一。由此可以想象，Sintaxin 1a是氯离子通道的协调剂，作为与大鼠开放释放有关的蛋白质。