L因子ベクターの応用:動物培養細胞中でのLFベクター上遺伝子の活性化と物質生産

L因子载体的应用：LF载体上基因的激活和培养动物细胞中的物质生产

基本信息

批准号：
62560095
负责人：
西森克彦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至 1988
项目状态：
已结题

项目摘要

Lファクター(LF)のエンハンサー部分とポリオーマウィルス(PyVA2)及びポリオーマECシミュータント(PyVN2)のエンハンサー部分を交換し、さらにこれにpHSG274由来のG418耐性遺伝子を連結した2種のプラスミドpPy274とpPyEC274を作製し、これら及び元型となったLF由来プラスミドpLIIN5をそれぞれマウスEC細胞であるF9細胞にCaPi法にて導入した。そしてこれらのプラスミドを安定に持つ株の樹立頻度を比較したところpLIIN5に比べpPy274ではその約1/20、またpPyEC274ではプラスミドとして安定に維持している株を取得することはできなかった。一方DNA導入後24〜80時間までの細胞内におけるこれらのプラスミドの一時的複製をみると、pPyEC274は高い効率で複製しており、これに比べpLIIN5やpPy274ではほとんど複製は観察できなかった。この結果は、CAT遺伝子をリポーター遺伝子としてLファクター、pyVA2株及びPyVN2株のエンハンサーの未分化F9細胞中での活性を調べた結果とも一致した。これらの結果はF9細胞中に於けるこれらのポリオーアウィルス由来、及びLF由来のエンハンサー活性、及び一時的複製の効率と、これらのDNAがF9細胞中に安定なプラスミドとして存在する株の樹立頻度に逆の相関性があることを示唆している。この結果はMol.Cell.Biol.Vol18,1988,pp2097-2104に投稿、掲載された。またLF上に様々なエンハンサー/プロモーターを連結し、リポーター遺伝子としてCAT遺伝子をこれらの配列の下流につないだpLMC2(MuLVLTR)、pLSC2(SV40初期遺伝子)、pLGC2(マウスβ-グロビン5'上流配列)等を作製し、これらをF9細胞に導入した。これらのプラスミドはF9細胞中でプラスミドとして安定に存在し、またLチノイン酸添加に伴うF9細胞の分化に従ってそれぞれのエンハンサー/プロモーターの性質にほぼ一致する転写の促進が観察された。この結果については現在投稿準備中である。

替换了L FISLAS（LF）的增强剂部分，脊髓灰质瘤病毒的增强剂部分（PYVA2）和polioma ec同时（PYVN2）以及两个质粒PPY274和PPYEC274和与pHSG274的G418抗基因相关的PPYEC274将CAPI方法引入了F9细胞，该细胞分别引入了由LF衍生的LF衍生的质粒Pliin5引入小鼠EC细胞。当这些质粒稳定时，与pliin5相比，在PPY274中，具有稳定份额的股票的形成频率和稳定的PPYEC274不能获得稳定的质粒。另一方面，在引入DNA后24至80小时内，查看这些质粒的暂时复制，PPYEC274以高效率重复，并且在PLIIN5和PPY274中几乎没有观察到。该结果是检查活性F因素，PYVA2共享和PYVN2股份在未分化的CAT基因作为报告基因的F9细胞中的增强子的份额。这些结果包括在F9细胞中得出的脊髓灰质炎A病毒，衍生自LF的活性增强剂活性以及临时重复的效率，以及这些DNA作为F9细胞中稳定质粒而存在的库存的形成频率。相反的相关性。结果已发布并发布在Mol.cell.biol.vol.vol18,1988，pp2097-2104上。此外，各种增强子/启动子在LF上连接，CAT基因作为报告基因连接到这些阵列的下游，PLSC2（SV40初始基因），PLGC2（小鼠β-珠蛋白5'上游布置）这些被引入F9细胞。这些质粒在F9细胞中作为质粒稳定，观察到与与添加L斜纹蛋白酸有关的F9细胞的分化，促进转录几乎与每个增强子/启动子的性质相匹配。结果目前正在准备。